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我国近十几年来一直是位居世界首位的水产养殖大国,却由于冷链流技术相对落后,导致很大一部分的水产品在运输和贮藏过程中腐败变质,造成了极大的经济损失。假单胞菌(Pseudomonas)为水产品有氧冷藏过程中的优势腐败菌,低温条件下依然可以繁殖生长。该菌有很强的蛋白质和脂肪分解能力,可产生氨类等有害产物。抑制假单胞菌的生长繁殖,可取得有效延缓水产品腐败的效果。噬菌体具有宿主专一性,对宿主以外的组织结构无毒副作用,作用安全高效,是针对优势腐败菌的有效防治手段,目前在食品贮藏中已有使用噬菌体的成功案例。本研究首先对一株分离自腐肉中的假单胞菌P-181进行了菌种鉴定,并测定了其在无菌鱼汁中的致腐能力。然后采用双层平板法,以假单胞菌P-181为宿主菌,从采集自不同省份的78个污水和土壤样品中,分离其烈性噬菌体,对噬菌体形态学和生化特征进行了鉴定分析。而后研究了该噬菌体在不同基质、温度和pH条件下的抑菌活性。最后测试了该噬菌体在4℃有氧冷藏条件下对大黄鱼的防腐能力。实验结果如下:1.根据假单胞菌P-181的16S rRNA序列分析和理化性质测定结果,可将其鉴定为Pseudomonas helleri。Pseudomonas helleri在不同温度和不同盐浓度下的生长活性显示,其在4~30℃和0~3%NaCl浓度条件下可以生长良好,在37℃和6%NaCl浓度条件下无法生长,表明其为嗜冷菌,非嗜盐菌。2.噬菌体PrH-181壳体为无尾二十面体结构,对氯仿不敏感,且核酸类型鉴定为RNA。根据ICTV对病毒的分类标准,PrH-181可鉴定为光滑病毒科噬菌体。噬菌体PrH-181的最佳感染复数(MOI)为0.01,一步生长曲线显示其潜伏期为20min,爆发期为180 min,裂解量为584。3.当噬菌体PrH-181的效价大于10~3 pfu/mL时在LB液体培养基和无菌鱼汁中均表现出显著的抑菌活性,且效价越高抑菌效果越好。噬菌体PrH-181在不同温度和pH条件下的抑菌活性实验结果显示,其在70℃水浴60 min之前都能保持较高的存活率,耐热性良好;最佳生长pH为6.0~7.0,在pH 6.0~9.0时其存活率可高达94.1~98.8%,碱性环境下的抑菌活性较其在酸性环境下强。4.在4℃有氧冷藏条件下,不同效价噬菌体PrH-181处理过的大黄鱼块,腐败进程均受到了抑制,对照组在第4 d开始腐败,10~4 pfu/mL的噬菌体处理组第8 d开始腐败,10~6 pfu/mL和10~8 pfu/mL的噬菌体处理组第12 d才开始腐败。可见噬菌体PrH-181对大黄鱼块的保鲜效果明显,且效价越高保鲜效果越好。