β2血影蛋白通过诱导肝癌干细胞的分化参与肝癌发生

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【目的】分选SNU398肝癌细胞株中Ep CAM+肿瘤细胞,鉴定其肿瘤干细胞特性,探讨β2SP对Ep CAM+肝癌干细胞细胞的诱导分化效应。【方法】采用流式细胞术检测SNUU398肝癌细胞株中表面标记物Ep CAM、CD133、CD90表达情况,使用抗Ep CAM磁珠抗体利用免疫磁性活化细胞分选法(Magnetic-activated cell sorting,MACS)获取标记物Ep CAM阳性及Ep C AM阴性细胞,通过流式细胞术检测其纯度。将分选出的Ep CAM阳性细胞分别进行化疗耐药实验、球体形成实验、NOD/SCID小鼠荷瘤实验及细胞侵袭实验,以鉴定Ep CAM+细胞具有肿瘤干细胞的特性。将真核表达载体pc DNA3.1(-)-β2SP以及对照空白质粒pc DNA3.1(-)分别转染Ep CAM+肿瘤干细胞,通过Real-time RT-PCR检测β2SP表达变化情况,并检测肝脏功能蛋白ALB及肝癌干细胞表面标记物Ep CAM、CK19基因表达变化情况。【结果】1.SNU398细胞株中Ep CAM表达率为(4.00±0.18)%,C D133表达率为(1.20±0.28)%,CD90表达率为(98.26±0.92)%;2.磁珠分选后SNU398细胞株Ep CAM阳性亚群Ep CAM表达率(82.3±3.8)%,阴性细胞亚群Ep CAM表达率为(3.95±0.21)%;3.在无血清培养基中,SNU398细胞株Ep CAM阳性细胞较Ep CAM阴性细胞形成更多的球体(93.33±10.41 vs 39.00±3.60);4.在克隆形成实验中,Ep CAM+细胞较Ep CAM-细胞具有更强的克隆能力(328.00±39.60 vs 133.00±28.28);NOD/SCID小鼠成瘤实验中,Ep CAM+细胞成瘤能力强于Ep CAM-细胞;5.Ep CAM+细胞较Ep CAM-细胞侵袭能力更强(136.00±32.62 vs 20.00±7.07);6.DOX耐药实验证实,Ep C AM阳性肿瘤细胞较其阴性细胞拥有更强的耐药性(存活率0.58±0.05 vs 0.46±0.03);7.Real-time RT-PCR结果示,pc DN A3.1(-)-β2SP转染Ep CAM+SNU398细胞后,β2SP的表达明显上调;8.Real-time RT-PCR结果示,Ep CAM+LCSCs转染β2SP后,肝功能基因ALB表达升高,LCSCs标志物基因Ep CAM、CK19表达降低。【结论】SNU398肝癌细胞株中Ep CAM阳性细胞具有肿瘤干细胞性质,β2SP对Ep CAM阳性肿瘤干细胞具有诱导分化作用。
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