阴沟肠杆菌w10j15中拟除虫菊酯类杀虫剂降解酶的酶学性质研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:net_worm
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本文采用HP6890气相色谱仪测定了联苯菊酯,甲氰菊酯和氯氰菊酯在水体中的添加回收率,3种菊酯在水体中都分别设计了1 mg/L,10mg/L,100mg/L 3个不同浓度的添加回收试验。结果表明,3种菊酯在水样中的添加回收率在95.47%至103.21%之间,变异系数在2.21%-4.72%之间。 从农药长期污染的土样中分离到一株阴沟肠杆菌w10j15,该菌株可以利用拟除虫菊酯类杀虫剂作为唯一碳源和能源进行生长。经研究表明(王兆守,2003),阴沟肠杆菌w10j15的生长最适p H为7.0,最适温度为30℃。该菌株培养72h,对50mg/L联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯的降解率分别为52.57%、50.13%和54.31%。在富集培养基培养72h后,可产生最高的联苯菊酯降解酶活性,达到约8U/mL(U为每分钟所降解的农药mg数)。 W10j15中提取的胞内酶降解联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯的最适反应p H均为7.5,最适温度均为40℃。该酶对联苯菊酯的米氏常数Km=440.58nmol/mL,最大反应速率Vmax=50.25nmol/min:对甲氰菊酯的米氏常数Km=332.23nmol/mL,最大反应速率Vmax=48.08nmol/min;对氯氰菊酯的米氏常数为Km=372.00nmol/mL,最大反应速率Vmax=63.29nmol/min。该酶与底物作用20min,对浓度分别为50mg/L联苯菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯的降解率分别为75%、58%、78%。该酶通过硫酸铵沉淀、凝胶过滤、离子交换柱层析等多步纯化;就联苯菊酯而言,降解酶比活力达到125.7U/mg,纯化了6.37倍,回收率为91.7%。经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,蛋白染色呈现一条主带,该降解酶的分子量约为65K D。等电聚焦测得的酶的等电点约为6.8。冻干后的酶保存于4℃冰箱中一个月后,对联苯菊酯的降解活力剩余70%。
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