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重症急性胰腺炎(SAP)属病理分型的急性出血坏死型胰腺炎(AHNP),本病起病急,病情凶险,死亡率高。这种疾病以血流动力学改变和全身炎症反应为特征,并导致多器官功能障碍。SAP的发病机制至今存在多种学说,临床尚无有效的治疗措施。胰腺微循环障碍是急性胰腺炎(AP)的启动、持续和加剧损害的因素。在本病程过程中,细胞因子的释放造成了全身性的反应,如:全身炎症反应综合症(SIRS)、多器官功能障碍综合征(MODS)、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、败血病等。此外,细胞因子在作为S.AP主要致死原因的多器官衰竭中起着轴心作用。
众多的细胞因子中,PAF是一种与胰腺微循环障碍密切相关的血管活性物质。PAF在体内主要通过特异性的PAF受体(PAF-R)将信号传递至细胞内调节细胞的生命活动。PAF.R属于7次跨膜的G蛋白偶联受体家族,活化后偶联于特异性的异三聚体G蛋白,开启胞内相应的信号转导通路。
银杏苦内酯B(Ginkgolide B,代号为BN52021)是血小板活化因子受体(PAF-R)的特异性拮抗剂。为“国宝”银杏叶提取物中的萜类化合物,近年来国内外的研究显示该化合物治疗AP效果显著,但是具体的作用机制尤其是分子机制缺乏深入研究。
目的:本实验以Wistar大鼠SAP模型为研究对象,以PAF-R的拮抗剂BN52021进行治疗干预,大体观察Wistar大鼠SAP模型的制作效果,用比色法技术检测血浆淀粉酶的变化,并对胰腺组织进行病理观察和评分;通过,western blot等技术检测大鼠胰腺组织PAF-R的动态变化。根据血浆淀粉酶活性、病理学评分和PAF-R表达量变化,评价BN52021对SAP的治疗作用和它对大鼠胰腺组织PAF-R的影响,同时结合前期研究及相关研究结果,探讨PAF-R在SAP时信号转导过程中的作用以及BN52021对此过程的治疗机制。
方法
雄性Wistar大鼠180只随机分为正常对照组(NC,n=60),SAP组(SAP,n=60)及BN‘52021治疗组(BN,n=60),每组按术后6个不同时相点(1h,2h,3h,6h,12h,24h)再分为6小组,各组10只。麻醉状态下,微量注射器逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠(1mL·kg<-1>),BN组术后15分钟股静脉注射BN 52021(5mg·kg<-1>),NC组、SAP组股静脉注射等量生理盐水。各组分别在处理后1h,2h,3h,6h,12h,24h麻醉并开胸和开腹,迅速采集心脏血液和胰腺组织。采用全自动生化分析仪检测血浆淀粉酶。取胰腺组织HE染色制片,观察胰腺组织的病理学变化,对其进行病理组织评分。提取胰腺组织蛋白,进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,Western blot测定胰腺组织PAF-R.蛋白含量,用图像分析系统进行定量分析。
结果
(1)血浆淀粉酶结果显示,SAP组和BN组在各时相点与NC组相比显著升高(P<0.05),BN组在1h、2h、3h、6h和24h较SAP组显著降低(P<0.05)。随着时间的推移,SAP组胰腺及周围组织器官水肿、出血和坏死面积逐渐扩大,程度逐渐加重,胸腹腔积液也增多。病理组织评分结果示,SAP组与BN组各时间点同NC组比较具有显著差异(P<0.05)。BN组在3h、6h、12h时点与SAP组具有显著差异(P<0.05)。 (2)胰腺组织中PAF.R的Westem blot结果显示,NC组在各时间点变化不明显,各时间点没有显著差异(P>0.05);SAP组和BN组组内各时间点的比较,1h、2h、3h、6h时间点具有显著差异(P<0.05),12h、24h时间点无显著差异(P>0.05)。SAP组和:BN组是动态变化的,早期逐渐上升,在3h达到高峰(P<0.05),以后逐渐降低。除1h时间点外,各时间点SAP组与NC组组间有显著性差异(P<0.05),BN组较NC组有显著性差异(P<0.05),BN组与SAP组无显著性差异(P>0.05)。
结论: (1)逆行胰胆管内注射5%牛磺胆酸钠制备大鼠SAP模型是成功的,可靠的;BN52021对大鼠SAP有一定的治疗作用。(2)PAF-R在SAP过程中早期显著升高,对SAP的病情发展有重要促进意义。BN52021对PAF-R蛋白表达无显著影响,可能通过竞争性抑制上升的PAF与表达量同时上升的PAF.R相结合,实现它的治疗作用。