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目的:肿瘤是疾病相关死亡的重要原因,其发生率和死亡率不断增加,尽管治疗手段的进步,肿瘤的临床预后依然很差。外泌体(exosomes)是细胞之间通讯的重要载体,间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分泌的exosomes是MSCs旁分泌的主要成分。exosomes作为治疗载体,在多种疾病包括肿瘤的治疗中有着重要的应用。本文旨在研究脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶(lipocalin-type prostaglandin D synthase,L-PGDS)对人脐带MSCs来源的exosomes的改造作用,以观其在肿瘤进展中的作用。方法:贴壁法分离培养脐带MSCs,编码L-PGDS(Ad-L-PGDS)和空载体(Ad-Vector)的腺病毒转染生长状态良好的MSCs,荧光显微镜观察转染效率,Western blot检测MSCs中L-PGDS的表达水平以验证转染效果。收集MSCs上清,ExoQuick-TCTM提取试剂盒分离exosomes,产生过表达L-PGDS的exosomes(EX-L-PGDS)和空载体exosomes(EX-Vector)。通过Western blot检测exosomes表面标记CD9、CD63和CD81的表达,透射电镜观察exosomes形态和大小,Nanosight可视型纳米颗粒分析仪检测exosomes的直径分布情况。Western blot检测exosomes内L-PGDS的表达情况。Vybrant CM-DIL染料标记exosomes,共聚焦显微镜检测肿瘤细胞对exosomes的摄取情况,RT-PCR和Western blot检测exosomes处理后肿瘤细胞内L-PGDS的表达水平。体外探寻L-PGDS修饰的exosomes对肿瘤细胞的抑制作用,使用exosomes处理肿瘤细胞株SGC-7901和SMMC-7721,迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡水平,平板克隆检测肿瘤细胞增殖能力。体内构建SGC-7901皮下荷瘤小鼠模型,以PBS和EX-Vector为对照,观察EX-L-PGDS对肿瘤生长的抑制效果。通过分析肿瘤生长速度、肿瘤重量大小、HE切片以评价EX-L-PGDS对肿瘤生长的影响情况。免疫组织化学染色检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,免疫荧光染色检测L-PGDS的表达,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,Western blot检测Bax、Bcl2和L-PGDS表达。结果:成功分离脐带MSCs,选择生长状态良好的MSCs,Ad-L-PGDS和Ad-Vector腺病毒转染。荧光显微镜观察结果显示腺病毒转染脐带MSCs 24h后有较好的转染效率,Western blot检测显示Ad-L-PGDS转染的MSCs内L-PGDS的表达明显增加。收集MSCs上清,采用ExoQuick-TCTM提取试剂盒分离exosomes。透射电镜观察过表达L-PGDS和空载体的exosomes(EX-L-PGDS和EX-Vector)均呈现典型的圆盘状,Nanosight可视型纳米颗粒分析仪检测粒径在100nm左右。Western blot结果显示两种exosomes均表达特异性标记CD9、CD63和CD81,与EX-Vector相比,EX-L-PGDS内L-PGDS的表达量明显增高。将exosomes与SGC-7901共孵育,exosomes能够被内吞进入SGC-7901,相较于EX-Vector,EX-L-PGDS明显增加SGC-7901内L-PGDS的表达量。Transwell迁移实验和侵袭实验表明EX-L-PGDS能抑制SGC-7901和SMMC-7721细胞的迁移和侵袭能力。流式细胞仪凋亡检测显示,EX-L-PGDS处理后SGC-7901和SMMC-7721凋亡细胞明显增多。平板克隆实验表明,EX-L-PGDS抑制SGC-7901和SMMC-7721细胞克隆形成能力。裸鼠皮下荷瘤实验显示,EX-L-PGDS处理的SGC-7901肿瘤生长更加缓慢,形成的肿瘤更小。HE切片显示EX-L-PGDS组肿瘤组织更加疏松,有更少的血管形成。免疫组织化学染色检测肿瘤组织PCNA表达,EX-L-PGDS组PCNA表达较低,TUNEL检测可见更多的凋亡细胞。免疫荧光染色检测EX-L-PGDS组肿瘤组织显示更多的L-PGDS表达。Western blot检测EX-L-PGDS组肿瘤组织Bax表达上调,L-PGDS表达明显增多。结论:成功构建了L-PGDS修饰的MSCs并获得EX-L-PGDS,EX-L-PGDS能够增加肿瘤细胞内L-PGDS的表达,体外抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭、克隆形成,促进凋亡发生,体内抑制肿瘤的生长。本研究为以exosomes为载体的肿瘤治疗方法提供了新思路。