论文部分内容阅读
目的:本研究以人肺腺癌A549细胞为研究对象,选择针对EGFR和HER-2的单克隆抗体尼妥珠单抗和曲妥珠单抗不同时相联合顺铂,通过体外细胞实验,分别观察尼妥珠单抗、曲妥珠单抗和顺铂单药及其不同时相联合对A549细胞增殖的抑制作用,旨在为临床治疗中靶向药物的选择及联合用药提供一定的实验依据。方法:(1)采用MTT法分别检测尼妥珠单抗、曲妥珠单抗不同时相联合顺铂及两种靶向药物不同时相联合顺铂的OD值计算细胞生长抑制率,并求得各组顺铂的半数抑制率(IC50),绘制细胞生长抑制率-药物浓度曲线。(2)采用流式细胞术检测各组A549细胞周期的分布情况。(3)采用Westernblot免疫印迹法检测各组对A549细胞中Cyclin D1蛋白表达水平。结果:实验一,实验分组为A组(不同浓度的单药顺铂)、B组(hR3序贯DDP模式)、C组(hR3和DDP同时模式)、D组(空白对照组)。MTT显示A、B、C三组对A549细胞有明显的增殖抑制作用,且随浓度及时间呈正相关,B组的增殖抑制率较A组更显著,72h最大抑制率达到96.48±0.76%,而C组反而较A组增殖抑制率减小,72h三组顺铂的IC50分别是1.58±0.02、0.74±0.03、2.42±0.06ug/ml,三者相比有显著统计学差异(P<0.01)。B组细胞生长抑制率-药物浓度曲线较A组明显右移,而C组细胞生长抑制率-药物浓度曲线较A组明显左移。流式细胞术显示A、B、C、D四组作用48h后A549细胞G0-Gl期细胞比例分别66.40±2.31、72.23±2.07、62.28±1.68、58.25±1.07%,B组G0-Gl期细胞的比例与A组相比明显增加(P<0.01),而C组G0-Gl期细胞比例反而低于A组(P<0.05)。Western blot免疫印迹法显示A、B、C、D组Cyclin D1蛋白表达量(用灰度值表示)分别为0.31±0.34、0.24±0.19、0.40±0.28、0.56±0.20;与对照组D组相比,各处理组Cyclin D1蛋白表达水平均有不同程度降低(P<0.05),其中B组中Cyclin D1蛋白表达量较A组下降明显(P<0.05),C组中Cyclin D1蛋白表达量反而高于A组(P<0.05)。实验二,实验分组为A组(不同浓度的单药DDP)、B组(Herceptin序贯DDP模式)、C组(Herceptin和DDP同时模式)。MTT显示三组药物对A549细胞有明显的增殖抑制作用,且随浓度及时间呈正相关,A、B两组无统计学意义(P>0.05),而A、C两组及B、C两组统计学有差异(P<0.05),C组的抑制率低于A、B组。三个时间点各组顺铂的IC50比较:A、B两组无统计学意义(P>0.05),而A、C两组及B、C两组统计学有差异(P<0.05),C组的IC50高于A、B组。实验三,实验分组为A组(单药DDP模式)、B组(hR3序贯DDP模式)、C组(Herceptin序贯DDP模式)、D组(hR3联合Herceptin序贯DDP模式)、E组(hR3联合Hercetin同时加用DDP模式)、F组(空白对照组)。MTT显示五组药物对A549细胞均有增殖抑制作用,且随浓度及时间呈正相关,72h五组对A549细胞的抑制率分别为56.97±1.42、82.17±1.62、60.13±2.56、90.97±1.32、60.01±1.61%,差异有统计学意义(P<0.05),D组抑制率最高,其次为B组,而A、C、E三组的抑制率无明显差别(P>0.05)流式细胞技术显示六组药物作用48h后A549细胞G0-G1期细胞比例分别为66.40±2.31、72.23±2.07、66.26±2.06、75.52±0.57、66.71±1.24、58.25±1.07%,A、B、C、D、E五组G0-G1期与F组空白对照组相比比例增加(P<0.05),其中D组比例最高,A、C、E三组G0-Gl期细胞比较无统计学意义(P>0.05)。Western blot显示六组Cyclin D1蛋白表达量(用灰度值表示)分别为0.31±0.34、0.24±0.19、0.33±0.10、0.12±0.14、0.32±0.11、0.56±0.20;与对照组F组相比,各处理组Cyclin D1蛋白表达水平均有不同程度降低(P<0.05),其中D组中Cyclin D1蛋白表达量下降最为明显(P<0.05)。结论:尼妥珠单抗序贯顺铂较单药顺铂的抑制率增高,说明尼妥珠单抗可加强顺铂的抗肿瘤作用,同时应用时却起到拮抗作用;曲妥珠单抗序贯顺铂较单药顺铂未发现抑制率变化,曲妥珠单抗同时加用顺铂的抑制率反而低于单药顺铂组,说明曲妥珠单抗不能增加顺铂的抗肿瘤作用,同时应用时起到拮抗作用。两种靶向药联合序贯顺铂可提高对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制率,并通过下调CyclinD1水平,使A549细胞抑制在G0/G1期。为临床上先使用靶向药物再给予化疗药及靶向药物的联合提供了一定的理论依据。