论文部分内容阅读
目的：通过研究糖基因在人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和低转移株MHCC97-L中的差异表达，明确这些糖基因与肿瘤侵袭及耐药性的相关性，从而为预测和诊断肝癌细胞侵袭和耐药性提供新策略和靶点。方法：(1)采用real-time PCR技术筛选人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和低转移株MHCC97-L中差异表达的糖基因，筛选出两组细胞表达差异在3倍以上的糖基因，初步探索糖基因在人肝癌不同侵袭性中的特征性改变。(2)应用流式细胞仪分析人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和低转移株MHCC97-L与多种FITC标记植物凝集素结合的能力，比较两种细胞表面糖链结构的差异。(3)通过RNA干扰技术干预糖基因MGAT3和MGAT5的表达，体外细胞侵袭实验检测干扰前后人肝癌细胞的侵袭能力；MTT法检测干扰前后人肝癌细胞的对化疗药物的敏感性，观测糖基因的表达调控对人肝癌细胞侵袭性和耐药性的影响。(4)进一步修饰MHCC97-H细胞的N-糖基化（衣霉素Tunicamycin和PNGase F处理），Western Blot检测糖蛋白CD147、整合素β1的表达水平；免疫共沉淀检测CD147和整合素β1结合的能力；体内、体外实验验证糖基化修饰后MHCC97-H细胞对5-氟尿嘧啶抗肿瘤作用的影响。结果：(1)在检测的62种糖基因中，有10种糖基因在MHCC97-H和MHCC97-L细胞株中具有差异表达；高表达的糖基因与FITC标记植物凝集素的结合能力增强。(2)免疫印迹实验结果表明，在MGAT3和MGAT5基因被干扰后，其蛋白质表达水平明显降低。体外侵袭实验和MTT实验证明，沉默MGAT3基因的可以增加MHCC97-L细胞株的侵袭性和对5-氟尿嘧啶的药敏性；而沉默MGAT5基因则可以降低MHCC97-H细胞株的侵袭性和对5氟尿嘧啶的药敏性。(3) MHCC97-H或MHCC97-L细胞经N-糖基化修饰后，糖蛋白CD147和整合素β1的表达水平发生改变；糖蛋白CD147和整合素β1在MHCC97-H细胞株中的表达水平远高于MHCC97-L细胞；体内和体外实验显示N-糖基化修饰可以降低肝癌细胞的侵袭性和对5-氟尿嘧啶的耐药性。结论：(1)人肝癌高转移细胞株MHCC97-H和低转移株MHCC97-L中糖基因及细胞膜表面糖链均有显著差异，这些特征性改变与肝癌侵袭性和耐药性具有相关性。(2)糖基因的改变、N-糖基化修饰均可作为肿瘤细胞的一个普遍特征，有可能为预测和诊断人肝癌细胞侵袭和耐药性提供新策略和靶点。