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前言： 帕金森病（parkinsons disease，PD）是发生在中老年常见的神经系统退行性疾病，主要病变在黑质纹状体通路，显微镜下可见黑质致密部(substantia nigra pars compacta，SNpc)大量多巴胺能(dopaminergic，DA-ergic)神经元凋亡，残留的神经元细胞胞浆中圆形嗜酸性路易小体(Lewy bodies，LBs)形成。环境毒素在该病发病过程中起重要作用。1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP）是公认的可致PD的环境毒素，作用机制比较明确。百草枯（paraquat，PQ）是农村地区广泛使用的除草剂之一，化学结构与MPTP活性产物1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridiniumion，Mpp+)相似，大量研究表明PQ暴露可能是一个导致PD的危险因素。在PQ致PD机制研究过程中，PQ诱导的动物模型已显示出其独特的作用，可在PQ诱导的啮齿类动物模型SNpc观察到典型的帕金森样改变。PQ诱导小鼠产生的效果与PQ的浓度、给药方式、PQ暴露时间相关，有些小组建立的PQ小鼠模型最初出现行为学异常、可观察到SNpc DA-ergic神经元明显减少，而有些小组的研究并未观察到上述结果，PQ暴露对小鼠SNpc DA-ergic神经元的选择性损害作用有待进一步研究。本研究将PQ腹腔注射于小鼠体内，应用自主活动测定的方法检测小鼠的运动功能，应用ELISA方法对小鼠血液中PQ进行定性分析，应用免疫组织化学染色和实时定量PCR(real time-PCR，RT-PCR)技术检测小鼠SNpc酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase，TH)蛋白和mRNA表达的变化情况，验证PQ对SNpc DA-ergic神经元的选择性损害作用，同时也为法医学鉴定中PQ对中脑毒理作用机制的阐明提供依据。 材料与方法： 8周龄健康C57BL/6雄鼠20只，体重20g～30g，按体重随机分为两组:给药组12只，对照组8只。给药组小鼠按10mg/kg剂量腹腔注射PQ，对照组小鼠腹腔注射相应量生理盐水，每周2次，共6周。停药后第二天，应用自主活动测定的方法检测两组小鼠的运动功能。之后，将两组小鼠麻醉后断头处死，收集每只小鼠血清，用于ELISA检测;剥离整个脑组织，分离左右半脑，右半脑用于苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，HE)染色、免疫组织化学染色检测，左半脑中脑用于RT-PCR检测。应用ELISA方法对两组小鼠血清中PQ进行定性分析。应用免疫组织化学染色方法检测两组小鼠TH蛋白表达的变化情况，选取每只小鼠SNpc典型部位连续5张切片，显微镜200×下，计数每张切片中可看到细胞核的TH阳性细胞数，5张切片的阳性细胞平均数为该小鼠SNpc的TH阳性细胞数;显微镜630×下拍照，应用Image-Pro Plus 6.0软件检测每张切片中TH的光密度值，5张切片的TH光密度值的平均值为该小鼠SNpcTH光密度值。应用RT-PCR检测两组小鼠SNpc TH mRNA表达的变化情况。测得的数据用均数±标准差((x)±s)表示，用PASW Statistics 18进行独立样本t检验分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果： 1、在整个6周暴露过程中，同对照组小鼠相比，PQ组小鼠体重未出现明显变化。 2、自主活动测定实验显示，同对照组小鼠相比，PQ组小鼠跨格数减少26％，差异具有统计学意义，站立次数减少37％，差异无统计学意义。 3、ELISA结果显示，PQ组血清中可检测到百草枯，同对照组小鼠相比，光密度值差异具有统计学意义。 4、免疫组织化学结果显示，PQ组小鼠SNpc DA-ergic神经元细胞核固缩、浓染，神经纤维走行紊乱，同对照组小鼠相比，DA-ergic神经元密度降低，数量减少13％，差异有统计学意义。 5、免疫组织化学结果显示，同对照组小鼠相比，PQ组小鼠SNpc DA-ergic神经元内TH蛋白分布不均，表达量显著下降，差异有统计学意义。 6、RT-PCR结果显示，同对照组小鼠相比，PQ组小鼠SNpc DA-ergic神经元内THmRNA表达量显著下降，差异有统计学意义。 结论： 1、PQ暴露可致C57BL/6小鼠出现类帕金森病症状，引起SNpc DA-ergic神经元数量减少，TH蛋白及mRNA表达水平降低。 2、依据本研究中PQ暴露小鼠所观察到的SNpc DA-ergic神经元的改变，可以考虑将这一动物模型用于后续相关实验研究中。 3、本研究应用ELISA方法检出血清中的PQ，对法医学鉴定中PQ中毒诊断可起到提示作用。