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第一部分长期双酚A暴露小鼠模型的建立及其脂代谢状况检测目的：研究人类曰常暴露剂量双酚A的长期慢性暴露对小鼠脂代谢的影响。材料和方法：建立双酚A暴露的小鼠模型。母鼠自生产第一天起,给予含有2.5μg/L(约0.5μg/kg/d,为人类日常接触剂量)双酚A的水。对照组母鼠则喂养单纯含溶剂(0.1%体积乙醇)的水。小鼠3周断奶后,继续给雄性子代小鼠喂养和其母亲含有相同剂量双酚A的水。检测对照组及双酚A组的雄性子代小鼠8周及10个月的体重、肝脏重量及内脏脂肪重量。用血糖测试仪测试其空腹血糖；用ELISA试剂盒测试其血清胰岛素水平；用TBA120FR生化分析仪检测小鼠血清血脂及肝转氨酶水平；用甘油三酯及胆固醇试剂盒测试小鼠肝脏甘油三酯及胆固醇水平；用油红-O染色及H&E染色观察小鼠肝脏脂肪堆积情况。结论：长期慢性接触人类日常暴露剂量的双酚A会使小鼠在10月龄(中年)发生体重增加、血糖血脂异常、肝脏甘油三酯及胆固醇堆积等代谢改变。第二部分：长期双酚A暴露小鼠的肝脏脂代谢相关基因的表达情况目的：研究长期双酚A暴露小鼠的肝脏脂代谢相关基因的表达变化情况以探究双酚A暴露导致小鼠脂代谢异常的机制。材料和方法：取双酚A及对照组两组8周及10月大雄性小鼠的肝脏组织,用Trizol法提取总RNA,运用逆转录试剂盒进行逆转录,用SYGR-Green法运用7900Real-Time PCR仪器行实时定量PCR检测比较两组小鼠肝脏的脂代谢相关酶及脂代谢相关转录因子的表达情况。结果：十月龄的小鼠中,双酚A暴露组肝脏组织中脂肪酸及胆固醇合成相关的基因表达明显上升,且甘油三酯及胆固醇转运相关基因、脂肪酸氧化相关基因的表达明显下降。其中Fasn的表达量双酚A组是对照组的2倍,而Scd1、Hmgcr及Sqle的表达量则是对照组的4倍。另外,调控脂肪酸及胆固醇合成关键的转录因子Srebf1及Srebf2的表达也明显上升。结论：双酚A所致的肝脏脂肪代谢异常及相关血脂异常的可能机制有：肝脏脂肪酸及胆固醇合成增加、肝脏甘油三酯及胆固醇转运异常及脂肪酸氧化分解抑制。而其中肝脏脂肪酸及胆固醇的合成增加在BPA所致脂代谢异常中可能发挥主要作用。转录因子Srebf1及Srebf2的表达上升则在BPA所致肝脏脂代谢相关基因表达异常中发挥重要的调控作用。第三部分DNA甲基化异常致双酚A暴露小鼠脂代谢相关基因差异表达目的：探究DNA甲基化在双酚A所致小鼠脂代谢基因表达异常中发挥的作用。材料和方法：取双酚A及对照组两组8周及10月大雄性小鼠的肝脏组织,提取DNA、总RNA及蛋白质。利用MassARRAY TM EpiTYPER DNA甲基化定量分析技术分析肝脏脂代谢相关的几个关键基因某个或某些特定CpG位点的甲基化水平。用Real-time PCR及western blot检测比较两组小鼠肝脏的甲基化转移酶(Dnmt1、Dnmt3a及Dnmt3b)的表达情况。运用Dnmtl/3a/3b siRNA将Hepal-6小鼠肝癌细胞系Dnmt1/3a/3b敲除后检测Hepal-6细胞系中的脂代谢相关基因的DNA甲基化水平,mRNA表达水平及Hepal-6细胞系中甘油三酯及胆固醇的水平,以探究DNA甲基化转移酶对脂代谢相关基因DNA甲基化、转录表达的作用。运用BPA处理Hepal-6小鼠肝癌细胞系并观察DNA甲基化转移酶的表达情况,以探究BPA暴露对DNA甲基化转移酶表达的影响。结果：8周小鼠中,双酚A暴露组的Srebf2及Hmgcr启动子区域的整体DNA甲基化水平较对照组低。10月小鼠中,双酚A暴露组Srebfl, Srebf2, Fasn及Hmgcr转录起始位点整体DNA甲基化水平都较对照组低。另外上述两个年龄组的双酚A组小鼠四个脂肪合成相关基因的多个CpG位点DNA甲基化水平也较对照组低。实时定量PCR和western blot检测显示,双酚A暴露组的8周小鼠中Dnmt1及Dnmt3a的mRNA.蛋白表达量和10月小鼠的Dnmt3b的mRNA、蛋白表达量较对照组低。Hepal-6细胞系中DNA甲基化转移酶敲除可导致脂代谢合成相关基因转录起始位点的去甲基化及mRNA表达量上升。BPA处理Hepal-6可以下调Hepal-6 DNA甲基化转移酶的表达水平。结论：双酚A暴露组中Srebfl, Srebf2, Fasn及Hmgcr启动子区域的DNA甲基化水平下降可能在双酚A所致上述四个基因表达上升中发挥一定作用。而双酚A暴露组中甲基化转移酶表达的下降是这些基因启动子区域DNA甲基化下调的重要原因。