论文部分内容阅读
目的：(1)了解碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)的临床分布、耐药现状及分子流行病学特征,为临床合理使用抗菌药物,预防和控制耐药菌株的流行提供实验依据。(2)探讨插入序列IS Abal、碳青霉烯酶及外排泵AdeABC系统与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的关系。方法：(1)收集湖南地区2012年4月～2013年3月10家综合医院临床分离的270株碳青霉烯类药物耐药的鲍曼不动杆菌；K-B法检测菌株对18种抗菌药物的敏感性；药敏结果以软件WHONET5.6进行分析。(2)采用重复序列引物聚合酶链反应(REP-PCR)分析来自不同医院的91株CRAB同源性。(3)改良Hodge试验检测碳青霉烯酶；双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶；多重PCR检测OXA-51、OXA-23、OXA-58、OXA-24等碳青霉烯酶基因及IMP、 VIM和SIM等金属β-内酰胺酶基因；PCR检测插入序列ISAbal-OXA-23、ISAbal-OXA-51及转座子Tn2006、Tn2008基因,并对扩增产物进行测序及BLAST分析。(4)采用美罗培南多步法诱导性耐药试验体外诱导敏感鲍曼不动杆菌以获得对碳青霉烯类药物耐药的菌株；E-test法定量检测诱导前后菌株的敏感性；CCCP抑制试验筛查外排泵；PCR及测序分析诱导前后AdeABC系统的调控基因adeS、adeR及主要碳青霉烯酶基因的变化；荧光定量PCR检测诱导前后adeA、adeB、adeR和adeS基因mRNA的表达量。结果：(1)270株CRAB主要分离自呼吸道标本(78.90%),其次为创面分泌物(10.74%)；科室分布以重症监护室(ICU)为主(50.0%),其次为神经外科(7.78%)、神经内科(7.41%)和烧伤科(7.41%)。在检测的18种药物中,14种药物耐药率超过90.0%。哌拉西林耐药率最高(100.0%),头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低(48.9%)。(2)91株CRAB共分为A、B、C、D、E、F、G7个型别,菌株数分别为79株、4株、2株、2株、1株、2株、1株；A型又分为A1和A2两个亚型,分别为46株和33株；所有被检测医院均出现A型菌株。(3)270株CRAB中,改良Hodge试验阳性156株,阳性率57.8%；金属酶表型检测均为阴性；所有菌株均检测到OXA-51基因,267株菌检测到OXA-23基因,1株检测到OXA-58基因,未检测至OXA-24、IMP、 VIM、SIM基因。41株对碳青霉烯类药物敏感的鲍曼不动杆菌OXA-51基因均阳性,OXA-23、OXA-58、OXA-24均阴性。267株菌的OXA-23基因上游均检测到插入序歹ISAbal,所有OXA-51基因上游均未检测至ISAbal;在检测的91株CRAB中,Tn2006阳性40株菌,Tn2008均为阴性。(4)亲代敏感菌株S25595和S7257美罗培南MIC分别为0.38和0.25μg/ml,诱导后MIC均>32μg/m1；与亲代敏感株相比,诱导耐药株adeA、adeB、adeR和adeS基因的mRNA表达量上升2.45倍～9.44倍,而调控基因adeS、adeR没有基因突变或插入序列。结论：(1)碳青霉烯类药物耐药鲍曼不动杆菌多重耐药十分严重；(2)本地区临床分离CRAB存在克隆流行,以A型为主。(3)OXA-51和OXA-23型碳青霉烯酶是本地区鲍曼不动杆菌的主要碳青霉烯酶；ISAbal-OXA-23是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药的重要机制,且主要通过转座子Tn2006进行传播。(4)外排泵AdeABC系统高表达与鲍曼不动杆菌对美罗培南耐药密切相关,其表达水平升高不是由调控基因adeS和adeF序列中基因突变或插入序列引起,可能存在其他机制参与。