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目的 建立以充氮膜肺、体外泵为基础、同种异体血为再灌注液的离体肺再灌注动物模型,研究大鼠供肺再灌注期间核因子-kB(NF-kB)的DNA结合活性、IkBa蛋白、粘附分子-1(ICAM-1)和细胞因子诱导的中性粒细胞趋化物(CINC)基因表达变化及其相关性,结合肺组织形态学的改变,探讨供肺NF-kB和细胞因子在供肺再灌注损伤中的变化,为进一步研究肺移植供肺再灌注损伤的机制和保护提供实验和理论的依据。 方法 建立离体大鼠供肺同种异体血离体再灌注动物模型。36只SD雄性大鼠,随机分成3组,分别为再灌注初始组(5min组)、再灌注30分组(30min组)和再灌注60分组(60min组)。每组12只,组内再分2个亚组,每个亚组6只,分别为供肺组(作为供体肺)和供血组(处死放血,供离体再灌注循环用)。腹腔注射3%戊巴比妥钠溶液麻醉,气管切开插管,接动物呼吸机;纵劈胸骨开胸,下腔静脉注射干素后,经左心耳-肺静脉-肺毛细血管网-肺动脉途径,以4℃LPD液在15-20mmhg压力下进行逆行灌注,同时切开肺动脉,直至双肺完全呈苍白,切取心肺块并于4℃LPD液中保存6小时后,将心肺块置入离体再灌注装置,经气管给予呼吸机通气,经体外泵将同种异体血泵出后,先经热交换器维持血液温度在37℃左右,后经充氮气人工膜肺使富含氧气的血液转变为静脉血,最后经肺动脉再灌注于供肺分别为5min、30min和60min。再灌注期间监测气道峰压和动脉血氧变化,分别在再灌注5min、30min和60min取右侧供肺组织行湿/干重和常规病理学检查,左侧肺组织立即置入液氮中,应用RT-PCR法检测肺组织ICAM-1 mRNA和CINC mRNA的表达,应用western blot检测IkBa蛋白水平,应用EMSA方法测定肺组织中NF-kB结合活性的变化。 结果 (1)再灌注期间,动脉血氧分压(PaO2)随着再灌注时间的延长而呈下降趋势,5min、15min、30min、60min时分别为346±18.16、327