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文昌鱼属于脊索动物门中的头索动物亚门,处于由无脊椎动物到脊椎动物的过渡位置。作为从无脊椎动物到脊椎动物过渡阶段的典型动物,文昌鱼一直是研究动物进化和胚胎发育的模式动物。SRA基因是一种类固醇激素受体的转录辅激活因子,也是首次发现的可以从RNA和蛋白质两个水平上发挥作用的分子。目前,对SRA基因的研究主要集中在在脊椎动物中,而在进化上占据关键位置的文昌鱼中是否存在SRA基因还不清楚。 本论文首先通过5’-RACE技术克隆了青岛文昌鱼SRA基因,命名为AmphiSRA。AmphiSRA基因序列全长1542 bp,含有一个525 bp的最大开放阅读框(ORF),编码有174个氨基酸组成的蛋白质,推测其分子量约为19.5 kDa。5’端含有一段165 bp的非翻译区(UTR),3’端含有一段852 bp的非翻译区。序列经NCBI BLASTP程序比对,发现其具有完整的SRA基因家族编码框。 利用Northern杂交的方法,对AmphiSRA基因是否在青岛文昌鱼中存在和大小进行了鉴定。杂交结果显示出三条条带,大小分别约为4 kb,1.6 kb和500 bp,我们得到的cDNA与其中一条大小一致。利用整体原位杂交检测文昌鱼的成体切片以及各时期的胚胎发现,AmphiSRA广泛分布于文昌鱼各个组织中,在脊索、神经索、鳃、肠以及卵巢和精巢中表达尤其明显,并且胚胎和成体中的表达情况一致。 AmphiSRA是否属于表达蛋白质类型,通过构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达来解决这一问题。通过对重组菌株的SDS-PAGE,发现AmphiSRA确实如推测的那样,属于可以表达蛋白质的亚型。经过His-tag抗体进一步的Western杂交鉴定,确实得到了特异性表达。