抗柑橘青霉菌活性真菌的筛选及作用机理研究

来源 :赣南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:henrychan168
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柑橘青霉病是柑橘采后重要病害之一,每年使柑橘产业蒙受巨大的经济损失。化学杀菌剂的使用是目前防治柑橘青霉病的主要措施。但是由于化学杀菌剂的泛滥使用,造成了柑橘青霉病耐药性逐渐增加,并且化学杀菌剂对人体健康具有潜在危害。植物内生菌及土壤源微生物是发现新型抗病原菌药剂的重要来源。本研究从植物内生菌及土壤微生物中筛选抗柑橘青霉病菌活性菌株,在此基础上,对其作用机理进行探讨。主要研究成果如下:1)活性菌株的分离、筛选及鉴定:从植物及土壤中分离获得36种真菌,进行发酵得到次生代谢产物,利用牛津杯法对发酵产物进行柑橘青霉菌抑菌研究,得到4种对柑橘青霉菌有抑制效果的菌株,并从中选定1株菌株GC-09进行深入研究。通过形态学分析及r DNA-ITS测序相结合方法鉴定菌株GC-09为棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)。菌株GC-09发酵提取物对柑橘柑橘青霉菌抑菌效果显著,其乙酸乙酯相在10 mg/m L浓度时抑菌圈大小为21.6±0.23 mm,其最小抑菌浓度(MIC)值为0.625 mg/m L。2)棘孢曲霉发酵产物对柑橘青霉病抑菌机理的研究:运用菌丝生长速率法,发现棘孢曲霉处理柑橘青霉菌可使其生长速度缓慢及菌丝重量大幅度减少;通过毒力回归方程分析,结果表明棘孢曲霉对柑橘青霉菌具有一定的浓度效应。在孢子萌发实验中用10 mg/m L棘孢曲霉乙酸乙酯相提取物作用36 h可以完全抑制柑橘青霉菌孢子萌发;扫描电镜结果显示1/2、1 MIC可以使孢子及菌丝褶皱、断裂、出现孔洞。PI染色结果表明棘孢曲霉提取物处理柑橘青霉菌可以破坏细胞膜的完整性;孢内可溶性蛋白变化验证了细胞膜通透性改变,而孢外内含物及电导率的变化验证了细胞膜通透性增加,从这三方面相互验证柑橘青霉菌细胞膜通透性的变化。同时,棘孢曲霉发酵产物处理柑橘青霉菌后,菌体细胞内活性氧含量明显升高,说明棘孢曲霉可以诱导柑橘柑橘青霉菌发生膜脂过氧化发应;棘孢曲霉处理过的柑橘青霉菌细胞体内的CAT及POD酶活性显著降低。3)棘孢曲霉发酵产物对赣南脐橙的保鲜效果研究:棘孢曲霉菌株发酵产物乙酸乙酯提取相可以延缓赣南脐橙果实病害发生,在低温储藏(4±1℃)及室温储藏(25±2℃)条件下,储藏期间果实腐烂率都明显低于对照组,并且低温储藏效果比室温储藏效果明显。
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