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随着全球民众对生态环境和人身安全的保护意识不断提高,各种农药在农业生产中的残留对环境和人类健康形成的威胁受到日益关注。本文通过对甲胺磷的免疫分析技术的研究,探索了几种有机磷农药的合适的快速检测方法。 本文采用多克隆抗血清制备技术,分别采取碳化二亚胺法和戊二醛法制备的甲胺磷-牛血清白蛋白结合物作为免疫原,免疫新西兰兔获得几种不同的多克隆抗体。 本研究通过合成了甲胺磷-琥珀酸-组胺-125I标记物,建立了甲胺磷的均相放射免疫分析方法,方法检出限为0.03nM(4.2pg/ml),变异系数5.2%;之后,将纯化后的抗体IgG包被聚苯乙烯试管,建立了甲胺磷固相放射免疫分析,方法检出限为0.05nM(7.0pg/ml),变异系数7.8%。 酶免疫分析法(Enzyme Immunoassay,EIA)法是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。本研究通过合成甲胺磷-辣根过氧化物酶结合物,建立了直接竞争法甲胺磷ELISA,方法检出限为5nM(700pg/ml),变异系数12.6%;通过生物素-亲和素技术建立了甲胺磷ABC-ELISA,方法检出限为1nM(140pg/ml),变异系数8.9%。通过合成兔抗甲胺磷-IgG-辣根过氧化物酶结合物,建立了甲胺磷硝酸纤维膜酶免疫渗滤法,方法检出限为100nM(14ng/ml)。 本研究采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,标记经亲和层析纯化的兔抗甲胺磷-IgG,进行了甲胺磷硝酸纤维膜胶体金免疫渗滤法和胶体金免疫层析法的探索。 研究结果表明,对于免疫定量测定农药残留目前以酶联免疫为佳,而今后的发展方向为化学发光免疫分析,时间分辨荧光免疫分析及免疫传感器。对于免疫定性测定农药残留目前以斑点酶联免疫渗滤法、斑点免疫金渗滤法为佳,今后的发展方向为金标免疫层析法。