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哮喘是多种细胞参与的慢性气道过敏性炎症。Th2型细胞因子IL-13在炎症反应过程中起关键作用。它可引起多种哮喘病理学变化,包括气道高反应性、肺部Eos增多、粘液分泌增加、IgE合成增多以及纤维化。在小鼠哮喘模型中,IL-13Rα2-Fc或抗IL-13单抗可有效抑制以上哮喘病理变化。一些抗IL-13单抗正处于临床前期试验阶段,最终临床效果尚待证实,但大量临床前试验数据显示IL-13阻断剂有望成为治疗哮喘的新药物。IL-13Rα2是个诱饵受体,可以阻断IL-13与IL-13Rα1/IL-4Rα结合,从而阻断IL-13的生物活性。可溶性IL-13Rα2(sIL-13Rα2)可有效拮抗其细胞因子,无单抗的异种免疫源性,对机体刺激反应小。目前未见sIL-13Rα2治疗哮喘的研究。国外研究人员已经在大肠杆菌表达系统中成功表达了重组狗IL-13Rα2-Fc(rcaIL-13Rα2-Fc)和重组狗IL-13Rα2(rcaIL-13Rα2)。本研究拟利用大肠杆菌表达系统表达sIL-13Rα2,为研究其治疗哮喘奠定基础。目的:在大肠杆菌中表达具有生物学活性的sIL-13Rα2。方法:将sIL-13Rα2基因克隆入原核表达载体pProEx HTa,构建重组表达载体pProEx HTa/ sIL-13Rα2,经酶切及DNA测序后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,A-549生物鉴定法测定纯化sIL-13Rα2的生物活性。SDS-PAGE分析表达产物,灰度扫描测量表达产物含量,超声破菌分析其可溶性,以Western-blot初步鉴定表达产物。结果:成功构建了pProEx HTa/sIL-13Rα2原核表达载体,并在大肠杆菌中表达出sIL-13Rα2,约占菌体总蛋白的45%。超声裂菌分析表达产物表明其以包涵体形式存在,并且可与抗小鼠sIL-13Rα2单抗发生特异性反应。SDS-PAGE分析纯化后sIL-13Rα2纯度大于95%。A-549生物鉴定表明sIL-13Rα2具有抑制IL-13刺激人肺上皮A-549细胞分泌人胸腺活化调节趋化因子(TARC)的生物学活性。结论:获得了有生物活性的sIL-13Rα2,为进一步探讨其治疗哮喘奠定基础。