【摘 要】
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为了实现对肝癌细胞的靶向性基因治疗,上海三维生物技术有限公司构建了产权自主的基因重组腺病毒H102,插入AFP启动子(α-fetoprotein Promotor)作为特异性启动子,使该系列腺
【出 处】
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上海第二医科大学 上海交通大学医学院 上海交通大学
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为了实现对肝癌细胞的靶向性基因治疗,上海三维生物技术有限公司构建了产权自主的基因重组腺病毒H102,插入AFP启动子(α-fetoprotein Promotor)作为特异性启动子,使该系列腺病毒只能在AFP阳性的肝癌细胞中选择性复制,产生溶瘤作用并表达携带的治疗基因.在正常组织和细胞中则不能复制和表达治疗基因,从而达到靶向性基因治疗的作用.为了在今后的前期实验和临床试验中从组织样品中检测出低浓度的H103DNA,我们另外设计了一对针对CMV和部分HSP的引物:A43-1和HLW-1,它的产物大小只有1kb左右.利用这对引物,我们对CMV-HSP插入基因进行了梯度PCR检测.结果显示:采用Taq酶系统,检测灵敏度可以达到10<4>OPU/μ1,采用Taq plus酶系统,检测灵敏度可以提高到10<3>OPU/μ1,完全可以满足质检和临床试验检测的要求.对H103中HsP70插入基因表达量的检测结果表明，用H103感染WI-38和2BS细胞后第二天，HsP表达量可达H101感染后表达量的10-80倍，二者间存在显著差异.证实H103中的重组人HsP70基因在细胞中能得到有效的表达.
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