本文主要从烟粉虱的抗药性筛选、代谢酶活性测定和靶标基因克隆等三个方面入手,对烟粉虱的抗有机磷和噻虫嗪性机理做了初步的研究。 以没有喷施任何农药的甘蓝为寄主食物,饲养四年的烟粉虱品系为敏感品系,在经过19代的辛硫磷筛选后,逐渐产生了40倍的抗性,F1—F15代抗性倍数很低,几乎控制在10倍之内,F15代以后,抗性倍数开始大幅度增高,至19代时达到了40倍。整个抗性筛选过程基本呈“S”形的开始形状,如果继续培养,抗性倍数会继续增加。 本文经过对不同品系烟粉虱的体内代谢酶活性测定发现,阿克泰抗性品系和辛硫磷抗性品系的乙酰胆碱酯酶明显区别于敏感品系。本试验也发现对噻虫嗪产生抗性的烟粉虱品系体内乙酰胆碱酯酶也不敏感。至于对阿克泰抗性品系和辛硫磷抗性品系与敏感品系的羧酸酯酶活性差异比较发现,辛硫磷抗性品系与B型敏感品系差异显著(1%水平),而阿克泰抗性品系与B型敏感品系差异不是很显著(1%水平)。阿克泰抗性品系、辛硫磷抗性品系和B型敏感品系之间的谷胱甘肽—S—转移酶活性没有差异,但是阿克泰抗性品系和辛硫磷抗性品系与敏感品系的多功能氧化酶活性在1%水平有差异。比较不同生物型烟粉虱的代谢酶活性测定发现,其乙酰胆碱酯酶活性没有明显差异;羧酸酯酶活性在5%有差异;而谷胱甘肽—S—转移酶活性没有差异。不同寄主烟粉虱品系之间代谢酶活性差异不显著,寄主对烟粉虱的代谢酶活性没有影响。所以,可以断定乙酰胆碱酯酶是辛硫磷和阿克泰对烟粉虱作用的共同靶标位点。 根据mt DNA CO Ⅰ基因序列的不同,测定了该试验的烟粉虱品系生物型,经过生物软件分析证明了该试验材料为B型烟粉虱。 经过RT-PCR技术进一步克隆了阿克泰抗性品系和辛硫磷抗性品系的乙酰胆碱酯酶基因,发现B型敏感品系与有机磷抗性品系共有4处碱基不同,3个氨基酸不同;B型敏感品系与阿克泰抗性品系共有5处碱基不同,3个氨基酸不同;并且,有机磷抗性品系与阿克泰抗性品系对于B型敏感品系的突变而言,仅有1处碱基不同,1个氨基酸相同。