五味子醇甲通过RhoA/ROCK信号通路修复SD大鼠糖尿病性勃起功能障碍的机制

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目的:通过建立糖尿病性勃起功能障碍(Diabetes-induced erection dysfunction,DIED)的Sprague Dawley(SD)大鼠模型,测定不同浓度五味子醇甲治疗前后阴茎组织中GTP-RhoA、p-MYPT-1、eNOS、NO、MDA、SOD水平,探讨五味子醇甲对大鼠勃起功能修复的可能机制。方法:1.筛选DIED大鼠:雄性SD大鼠注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠;8周后注射阿扑吗啡(APO)筛选糖尿病性勃起功能障碍(DIED)大鼠。2.分组及处理:随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病性勃起功能障碍组(DIED组)、五味子醇甲低剂量组(5mg/kg/d,L-S组)、五味子醇甲中剂量组(10mg/kg/d,M-S组)、五味子醇甲高剂量组(20mg/kg/d,H-S组)。3.灌胃8周(1次/日)后再次给予APO,观察阴茎勃起情况。电刺激大鼠海绵体神经检测阴茎海绵体内压(ICP)、平均颈动脉内压(MAP)。4.实验期间每周测一次血糖,四周测一次体质量。实验结束后取血测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、血肌酐(SR)、血钠(Na)、血钾(K)、血钙(Ca)水平。5.Pulldown法测定GTP-RhoA活性、Western blot检测磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1(p-MYPT-1)水平、硝酸还原酶法测定NO浓度、一氧化氮合酶活性检测试剂盒测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)浓度、TBA法测定丙二醛(MDA)浓度、羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)浓度。结果:1.各组大鼠在注射STZ之前体质量及血糖无差异(P>0.05)。与NC组比,注射STZ 3天、4周和8周后,DM组体质量下降,血糖升高(P<0.002)。与NC组比,灌胃前及灌胃后4周和8周,DIED组、低、中、高剂量组大鼠体质量均下降,血糖增高(P<0.001);除NC组外各组间比较,大鼠体质量及血糖无差异(P>0.05)。2.灌胃8周后,NC组的勃起率为100%,DIED组和L-S组为0.0%,M-S组为16.6%,H-S组为28.5%。3.电刺激前各组ICP、MAP及ICP/MAP无差异(P>0.05)。电刺激时,各组MAP无差异(P>0.05);与NC组比,DIED组、低、中、高剂量组ICP及ICP/MAP降低(P<0.001);与DIED组比,低、中、高剂量组ICP上升(P<0.05);与DIED组比,中、高剂量组ICP/MAP上升(P<0.05)。4.各组大鼠血清中ALT、AST、ALP、SR、Na、K及Ca水平无统计学意义(P>0.05)。5.DIED组中,eNOS、NO表达下降,与NC组比有统计学意义(P<0.002);与DIED组比,低、中、高剂量组中eNOS、NO表达升高(P<0.05)。低、中、高剂量组中L-S组与H-S组比有统计学意义(P<0.002)。6.DIED组MDA表达升高,SOD表达下降,与NC组比有统计学意义(P<0.05);与DIED组比,低、中、高剂量组中MDA表达降低,中、高剂量组中SOD表达升高(P<0.05)。低、中、高剂量组中L-S组与H-S组比有统计学意义(P<0.05),其中H-S组中MDA表达水平更低,SOD表达水平更高。7.DIED组中,GTP-RhoA和p-MYPT-1表达升高,与NC组比有统计学意义(P<0.05);与DIED组比,低、中、高剂量组中,GTP-RhoA和p-MYPT-1表达下降(P<0.05)。低、中、高剂量组中L-S组与H-S组比GTP-RhoA表达有统计学意义(P<0.05)。低、中、高剂量组中L-S组与H-S组比p-MYPT-1表达无统计学意义(P>0.05)。结论:1.糖尿病勃起功能障碍SD大鼠的阴茎组织中存在氧化应激损伤。2.五味子醇甲可以改善糖尿病性勃起功能障碍SD大鼠的勃起功能,其中高剂量组(20mg/kg/d)的五味子醇甲效果显著。3.五味子醇甲改善糖尿病SD大鼠勃起功能障碍可能的机制:通过抑制RhoA/Rho激酶表达而提高eNOS、NO表达。4.一定剂量内五味子醇甲对糖尿病SD大鼠肝肾功能及电解质无明显影响。
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