【摘 要】
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该文工作在建立成年小鼠局灶性脑缺血模型的基础上,应用免疫组化和RT-PCR的方法研究L-型钙通道阻断剂尼莫地平对缺血后海马新生细胞增殖和iNOSmRNA水平的影响,旨在阐明L-型钙
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该文工作在建立成年小鼠局灶性脑缺血模型的基础上,应用免疫组化和RT-PCR的方法研究L-型钙通道阻断剂尼莫地平对缺血后海马新生细胞增殖和iNOSmRNA水平的影响,旨在阐明L-型钙通道和神经元再生的相关性,为进一步探索脑缺血后神经元再生机制提供实验依据.目的:该实验旨在研究:一.L-型钙通道是否调控成年小鼠局灶性脑缺血后海马DG区的神经元再生;二.如果存在这种调控作用,则是否通过调节iNOS而实现.材料与方法:血管内栓线法阻塞大脑中动脉1.5h然后再灌注制备局灶性脑缺血模型.实验动物随机分为9组,第1-3组用于免疫组化实验,第4-6组用于RT-PCR实验,第7-9组用于TTC染色实验.第1,4,7组为伪手术组,手术操作同模型组,但不进行MCAO.第2,5,8组为模型组,行MCAO手术.第3,6,9组为给药组,手术前三天尼莫地平灌胃给药(6mg/kg·d).免疫组化实验组:于手术后第五天给BrdU(50mg·kg<-1>,i.p),每12小时给一次,共6次.于末次给BrdU后6h行4％PFA脑部灌注,振荡切片机切取冠状脑片,检测海马齿状回的细胞再生情况.RT-PCR实验组:再灌后24h分离各组缺血侧和对侧的海马,提取组织总RNA,经反转录为cDNA后,PCR扩增iNOS目的基因.琼脂糖凝胶电泳检测转录目的cDNA.TTC染色实验组:再灌后24h取全脑,切成矢状切片,2%TTC溶液中37℃孵育15min,后成像比较缺血梗死区面积大小.
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