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Prrx1(MHox、k2、Pmx、Prx1)、Prrx2(S8、Prx2)和Prrx3(Prx3、SHOX2、SHOT、OG12)是高度保守的同源异型框基因转录因子。Prrx1缺乏鼠有腭裂,脊柱骨骼缺陷和四肢、颌骨、桡尺骨和胫腓骨轻微的组织发育不良。Prrx2缺乏小鼠基本无形态学变化,但有轻微的心肌功能异常。Prrx1和Prrx2都缺的表现型显示它们在脊柱、舌骨弓、颅面、大动脉弓、垂体和肢体发育都有重要影响。即使是在截肢的情况下,一些两栖类动物的受损部位可以再生,而且没有瘢痕。这种完美的愈合过程涉及Prrx1基因,但对于哺乳动物,在胚胎无瘢痕伤口愈合中起重要作用的是Prrx2基因。Prrx3基因表达于胚胎期的中胚层和外胚层,与骨和软骨的形成、大脑、脊髓、神经、心脏、颅面部和近端肢体的发育有关。Prrx3基因的甲基化与肺癌具有密切关系,可能成为肺癌的早期筛查指标。本研究旨在研究家兔Prrx1、Prrx2和Prrx3基因的结构,表达图谱和在不同时期各组织的动态变化,为Prrx1、Prrx2和Prrx3基因的进一步的研究和应用提供参考。本研究主要获得以下成果:1.本研究首次克隆得到新西兰白兔Prrx1a(登录号:KP726284)、Prrx1b(登录号:KM222500.1)、Prrx2和Prrx3(登录号:KP726285)基因,并对其DNA序列和氨基酸序列进行生物信息学的分析,预测其可能的生物活性、结构及功能。2.本研究分别构建了pET32a(+)-Prrx1a/Prrx1b/Prrx2/Prrx3四种原核表达载体,转化进入BL21感受态细胞。用IPTG进行诱导表达,优化IPTG诱导浓度、时间、温度。超声破碎,HistrapTM HP纯化柱进行纯化,并用Western blot证实了融合蛋白的抗原性良好,能够被鼠抗人Prrx2 IgG识别。3.本研究首次对新西兰白兔的常用的六个内参基因GAPDH、HPRT1、18S rRNA、B2M、Sdha、β-actin的表达稳定性进行比较。证实新西兰白兔不同的发育时期和组织中,最稳定的内参基因不同。推荐在进行新西兰白兔的相关试验时,可以选择上述表达最稳定的至少3个内参基因的几何平均数作为标准化相关RT-PCR数据的指标,以确保试验组个体间的差异最小,和小变量的准确数据分析。4.本研究首次用RT-PCR的方法确定不同发育阶段各器官中新西兰白兔Prrx1、Prrx2和Prrx3基因mRNA的表达量。并比较了部分器官中Prrx1的两种变异剪切体Prrx1a和Prrx1b的表达量差异。5.用免疫组化的方法证实Prrx家族蛋白在新西兰白兔各器官的表达。由于转录后调控,mRNA的表达量与蛋白在各器官的表达量并不完全相同。然而,由于缺乏有效的单克隆抗体,不能有效区别几种蛋白。