无花植物表达载体构建及功能验证

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入侵植物因其繁殖能力强、生长速度快和适应性广等特点,往往对本地的生物、环境以及人类本身造成巨大的损害。意杨、法国梧桐等速生树种,飘絮和掉毛问题一直是园林部门最为困扰的问题,如何解决这些问题成为目前越来越亟待解决的问题。“无花技术”是利用基因工程技术,使转基因植物开花受阻,不产生花粉、果实和种子,不影响园艺植物的观赏性。经此技术改良的植物将不再传播花粉或通过种子繁殖和传播,其侵入性大大降低或被消除,没有因花粉扩散而造成的外源基因逃逸和基因污染的现象,也不会对环境造成危害。 本研究从拟南芥基因组中克隆出控制花叶原基发育的LEAFY基因的启动子,并依据不同启动子不同长度分别克隆了1.5kb、2.0kb、2.5kb,三种长度的片段,分别为LEAFY15、LEAFY20、LEAFY25。并与来自于解淀粉芽孢杆菌编码核糖核酸酶的Barnase基因融合后,克隆至pCAMBIA1305.1表达载体上,构建出3组植物不育表达载体。在EHA105农杆菌介导下转化烟草,GUS染色筛选转基因植株,温室培养,约两个月左右之后,观察各组烟草开花情况。结果显示:1)三种不同长度启动子启动毒素基因表达的效率有巨大差异,只有2.5kbLEAFY启动子具有驱动毒素基因表达效率。2)转化LEAFY25-Barnase-NOS-pCAMB1A1305.1的烟草表现出了极强的无花特征,彻底不开花,并且继代培养观察无花特征稳定遗传。
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