抗生素在临床上的过度使用导致大量细菌产生耐药性。耐药细菌,包括近年在全球蔓延的“超级细菌”已导致几乎所有抗生素失效。因而,耐药细菌的抑制是各国政府、医药行业和学术界目前密切关注的热点。应对细菌耐药的理想策略是研究和发展细菌耐药靶蛋白的抑制剂,以其与抗生素协同使用来完成抑制。另外,近年来发展的光动力学灭菌疗法,对耐药细菌的灭活显示出极大潜力。朝着这一目标,本论文致力于细菌耐药靶蛋白金属p-内酰胺酶及革兰氏阳性耐药细菌的抑制研究。具体内容有以下方面：1.表达、纯化并表征了B1、B2和B3亚组金属β-内酰胺酶CcrA、ImiS和L1；合成并表征了该类酶的快速检测试剂头孢硝噻吩；首次报道了两种对产金属β-内酰胺酶耐药菌株具有良好灭活效果的一氧化碳释放分子,并对其进行了灭菌活性评价。2.首次利用微量热法系统测定了金属β-内酰胺酶CcrA催化青霉素G、先锋V及亚胺培南水解反应的热力学参数,包括活化吉布斯自由能、活化焓、活化熵及表观活化能等；使用稳态动力学方法测定了相关反应动力学参数。实验结果为进一步研究金属p-内酰胺酶与细菌对p-内酰胺抗生素的耐药机理提供了数据基础。3.常规光动力学灭菌疗法的缺点在于其光敏剂缺乏选择性,为了突破该瓶颈,在合成得到5,10,15,20-四(4-氨基苯基)卟啉等6种卟啉类光敏剂基础上,成功构建了一种新型卟啉-万古霉素缀合物,以分子排阻色谱将其分离,并得到飞行-时间质谱确认。光动力学灭菌实验结果表明,这一新颖的缀合物在其万古霉素组分的引导下,可靶向性富集于革兰氏阳性耐药菌菌体,其光敏剂组分卟啉可有效发挥光动力效能。在浓度为10μM,光照时间为5min时能成功灭活临床采集的革兰氏阳性耐药菌。其中对MRSA-1、 MRSA-2的灭活率均高于95%,对“超级细菌”VRE的灭活率也达70%。表面等离子共振研究结果表明,该缀合物可灵敏识别革兰氏阳性致病菌,而非革兰氏阴性菌。以上研究为革兰氏阳性耐药菌的识别和灭活提供了新途径。4.设计并成功合成了19种全新的唑基硫代乙酰胺类金属p-内酰胺酶抑制剂。酶抑制活性实验结果表明,所有化合物对B1亚组金属β-内酰胺酶NDM-1的抑制效果良好,以先锋V为底物时,其半数抑制浓度(IC50)值分布在0.1-1.7μM范围内。结构-活性关系表明,唑基硫代乙酰胺骨架结构是该类抑制剂发挥活性的基础,且不同基团的引入可有规律地改变其生物活性。