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本文将胡杨Na+/H+逆向转运蛋白同源基因PeNhaD1转入到酿酒酵母及大肠杆菌中进行表达,以研究其结构、功能及细胞定位。将PeNhaD1构建到酵母表达载体pYES2.0上,转入盐敏感的酵母突变菌株ANT3(?ena1-4::HIS3 ?nha1::LEU2,缺失质膜Na+/H+逆向转运蛋白的基因ScNHA1)和GX1(?nhx1::TRP1,缺失液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因ScNHX1)中,进行酵母耐盐功能互补实验。结果表明,在pH 6.0,Na+浓度为80mM的条件下,转化有目的基因的酵母菌ANT3-PeNhaD1比转化有空载体的对照具有更高的耐盐性,而将目的基因转化到突变株GX1时,却不能提高其耐盐性。实验结果说明PeNhaD1可能是通过编码质膜Na+/H+逆向转运蛋白而提高酵母的耐盐性,推测其在胡杨耐盐机制中的作用可能是提高细胞的拒盐性。同时,分别将水母绿色荧光蛋白GFP基因及PeNhaD1-GFP融合片断插入到大肠杆菌表达载体PTAC-MAT-2中,构建了原核表达与细胞定位多功能载体PTAC-GFP及PTAC-PeNhaD1-GFP。菌落PCR及测序结果显示两个载体构建成功。将载体转入到宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG(终浓度为0.4mM)诱导表达2～4小时,SDS-PAGE、Western-Blotting及荧光显微镜中观察结果均显示GFP蛋白在BL21(DE3)中大量表达并能在蓝光的激发下发出强烈荧光,而PeNhaD1-GFP融合蛋白在BL21(DE3)没有表达。另外,将PeNhaD1构建到另外一个原核表达载体pTWINⅠ中尝试表达目的蛋白,但是全菌及过柱纯化后的SDS-PAGE结果均未显示其得到表达。因此,关于PeNhaD1的原核表达工程还有待于进一步研究。