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第一部分 anti-EGFR和iRGD双靶向高穿透性磁共振探针anti-EGFR-iRGD-DTPA-Gd 的构建及 MRI 检测目的 建构双靶向高穿透性磁共振探针anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA,观察其在体外靶向能力及作为MR特异性造影剂的弛豫能力。方法 先采用原核表达、镍柱亲和层析方法制备单域抗体anti-EGFR及双靶向融合蛋白anti-EGFR-iRGD,再采用蛋白成肽方法将前者连接钆Gd,制备出融合蛋白钆 anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA 及单域抗体钆 anti-EGFR-Gd-DTPA,用氢谱核磁共振方法对合成探针进行表征,并采用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)测定合成探针的钆浓度。采用MTT法验证anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA的安全性。将 anti-EGFR-Gd-DTPA、anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA 连接荧光素 FITC,通过免疫荧光法、免疫竞争结合实验观察胃腺癌细胞株BGC-823摄取两种合成磁共振探针结合的能力。采用3.0T的T1WI、T1-map成像方法检测anti-EGFR-Gd-DTPA、anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA 的弛豫能力。结果成功制备双靶向融合蛋白钆探针和单靶向单域抗体钆探针。体外摄取实验显示胃癌细胞株 BGC-823 对 anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA 的摄取较 anti-EGFR-Gd-DTPA的多,并且证明anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA是一个有双靶点的探针(与西妥昔单抗、iRGD有相同的靶点)。MR成像显示探针的弛豫率为10.157mM-1S-1,高于 Gd-DGPA 的弛豫率(4.851 mM-1S-1)(p<0.01)。结论 成功制备出双靶向磁共振探针anti-EGFR-iRGD-Gd-DTPA,和对照组比较该探针安全性好,并在体外实验中对高表达EGFR和整合素的BGC823细胞具有较强的结合能力,比单靶向探针结合能力强,弛豫率高。第二部分双靶向高穿透性磁共振探针靶向胃癌的MRI成像目的检测双靶向高穿透性磁共振探针anti-EGFR-iRGD-DTPA-Gd用于高表达EGFR及iRGD受体的胃癌移植瘤的MR靶向作用。方法 建立裸鼠皮下移植瘤模型,待皮下瘤约为2周左右长大至直径1cm-1.5cm大小时进行试验。麻醉成功后由尾静脉分别注射等效钆浓度为42 μmol Gd/kg的 anti-EGFR-iRGD-DTPA-Gd,anti-EGFR-DTPA-Gd 和 Gd-DTPA,分别在注射前和注射后15min、30min、1h、2h、3h各个时间点进行磁共振T1WI序列的扫描。用 PHLIPS DICOM Viewer R.25 Version 软件测量注射前和注射后 15min、30min、1h、2h、3h的信号强度变化。采用梯形图解法计算各个器官信号强度的AUC曲线下面积。采用SPSS16.0统计软件进行统计分析。结果 在 anti-EGFR-iRGD-DTPA-Gd 组和 anti-EGFR-DTPA-Gd 组,肿瘤组织的信号强度到达峰值的时间分别是30min和1h,较Gd-DTPA组延长。在三组中,肿瘤组织的信号强度及 AUC 曲线下面积由高到低分别为anti-EGFR-iRGD-DTPA-Gd 组>anti-EGFR-DTPA-Gd 组>DTPA-Gd 组(P<0.05)。结论双靶向高穿透性磁共振探针anti-EGFR-iRGD-DTPA-Gd在体内具有较好的肿瘤靶向能力,具有作为胃癌靶向诊断的MR特异性造影剂的潜能。