深度皮肤缺损创面的修复在烧伤、创伤、慢性皮肤溃疡、瘢痕整形等的治疗中具有重要意义。传统移植自体皮的治疗方法常常导致供皮区色素改变和瘢痕形成,而皮肤缺损面积较大时自体皮源不能满足移植的要求。皮肤组织工程技术的发展与应用为改善创面修复质量,解决皮源问题开辟了崭新的途径。其中真皮替代物的研制是皮肤组织工程的基础也是技术关键。国外研究者已成功地开发出了多种真皮替代物,并已初步应用于深度烧伤创面的修复及瘢痕整形等领域,取得了一定临床效果,但是制品的价格非常昂贵。因此,研制和开发适合我国国情和经济实用的高质量真皮替代物具有重要的意义。本研究应用组织工程学的原理和方法,用本实验室提取的Ⅰ型胶原复合壳聚糖制备出双层胶原-壳聚糖海绵支架,并对其理化和生物学性能进行了系统研究;用从大鼠皮肤中分离出皮肤成纤维细胞,将其种植在支架上体外构建了人工真皮替代物,并将人工真皮替代物移植到SD大鼠全层皮肤缺损创面上,得出以下结果:1.以胶原和壳聚糖为原料,戊二醛为交联剂,采用冷冻干燥的方法制备了双层胶原-壳聚糖海绵支架;制备的胶原-壳聚糖海绵支架具有较高的孔隙率、良好的吸水性能和一定的力学强度;生物学评价结果证明,该支架无细胞毒性,无明显的皮肤刺激性;皮下埋植28天仍能观察到支架存在、具有良好的组织相容性,支架可在体内缓慢降解吸收。2.成功地从新生SD大鼠皮肤中分离出成纤维细胞;将成纤维细胞种植到胶原-壳聚糖海绵支架上,在体外构建出了具有一定功能活性的人工真皮替代物。3.通过建立的SD大鼠皮肤缺损模型,用构建的人工真皮替代物在SD大鼠脊背两侧皮肤进行了移植实验,对人工真皮替代物促进组织再生能力进行了评价。实验结果表明,该人工真皮替代物组织附着性、吸液性好,能促进伤口愈合。组织学检查结果表明,该人工真皮替代物具有引导组织形成,促进组织细胞生长的效果。总之,本研究构建的活性人工真皮替代物理化性能和生物相容性好,可以作为人工真皮替代物用于皮肤缺损的修复。