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目的:探索半枝莲、白花蛇舌草、半枝莲+白花蛇舌草提取物在体内外水平上的抗肝细胞癌(HCC)活性、抗HBV活性及从circ RNAs调控角度,探讨半白提取物对HCC生长的可能分子作用机制,为半白提取物治疗HCC的作用机制研究提供理论基础。方法:本研究采用完全随机的实验设计类型,1.分别通过乙醇加热回流的方法制备半枝莲、白花蛇舌草、半枝莲+白花蛇舌草提取物,并进行总黄酮及其活性成分木犀草素和芹菜素含量测定;2.通过CCK-8、平板克隆形成、流式细胞术、Transwell小室、细胞免疫荧光及裸鼠皮下接种Hep3B移植瘤模型等实验,明确半白提取物对HBV相关性Hep G2.2.15和Hep3B细胞生长、侵袭、转移、HBV活性及裸鼠移植瘤的影响;3.通过高通量测序技术对circ RNAs的差异表达进行初步检测,观察半白提取物调控Hep3B细胞circ RNAs差异表达谱变化,应用生物信息学方法预测靶基因、GO功能和KEGG信号通路,并构建circ RNA-mi RNA-gene共表达网络图。结果:1.半枝莲、白花蛇舌草及半枝莲+白花蛇舌草提取物的总黄酮含量分别为(5.69±0.34)%、(2.47±0.14)%和(5.20±0.08)%,其中木犀草素含量分别为(0.143±0.001)%、0%、(0.050±0.001)%,芹菜素含量分别为(0.182±0.003)%、0%、(0.072±0.001)%。2.与对照组相比,半白提取物在一定范围内以浓度依赖性和时间依赖性的方式抑制Hep G2.2.15和Hep3B细胞的生长,半白提取物可以抑制细胞的克隆形成率,使G0/G1期细胞比例增加和G2/M期减少,增加细胞凋亡率,抑制细胞迁移和侵袭,降低Hep3B荷瘤裸鼠肿瘤体积和移植瘤重量,降低移植瘤中Ki67、PCNA表达,增加P21、P27表达,抑制HCC细胞、移植瘤裸鼠肝组织和血清中的HBs Ag和HBV-DNA m RNA相对表达量,均具有统计学差异(P<0.05或P<0.01);细胞增殖和凋亡有关的蛋白Cyclin D1表达稍降低,P53和Bcl-2表达降低,P21和Bax表达增加(Hep3B细胞P53缺失);倒置显微镜、透射电子显微镜和细胞免疫荧光结果显示,经半白提取物处理后HCC细胞形态发生明显变化,核固缩,细胞数量不同程度的减少,胞质内自噬小体明显增多,自噬相关蛋白Beclin1和LC3B聚集较对照组明显减少。3.分析和鉴定出使用半白提取物前后Hep3B细胞中circ RNAs差异表达谱,GO功能和KEGG通路分析也显示了差异表达circ RNAs的生物学功能;共有5504个差异circ RNAs与751578个mi RNA靶向结合,筛选HBV相关性HCC有关的mi RNA,绘制了circ RNA-mi RNA-gene共表达网络图。结论:1.证实半白提取物中均含有总黄酮类,半枝莲的总黄酮类活性成份含有木犀草素和芹菜素,而白花蛇舌草中未检测到木犀草素和芹菜素。2.半白提取物通过抑制HCC细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞凋亡,抑制HCC细胞迁移和侵袭,抑制自噬相关蛋白的表达,促进自噬小体的生成和抑制HBs Ag、HBV-DNA复制等多途径抑制Hep G2.2.15和Hep3B细胞的体内体外生长;但半枝莲和白花蛇舌草联用后在抑制HCC的体内外生长和抑制HBV活性方面未见明显的协同作用。3.发现半白提取物可调控Hep3B细胞circ RNAs差异表达,并可能通过改变多种circ RNA-mi RNA-gene共表达影响HBV相关性HCC细胞生长。