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目的:缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury)能够诱发肠道上皮细胞特别是小肠上皮细胞内各细胞器的破坏和应激,从而影响特定蛋白的表达和相关因子的释放,最终引起肠道上皮细胞的损伤或凋亡。肠上皮细胞缺血再灌注后在膜损伤、钙超载、线粒体损伤、内质网应激及相关酶激活的影响下,对细胞质内的硫氧还蛋白互作用蛋白和炎性小体3的表达产生明显影响。而TXNIP/NLRP3过度表达又对胞内IL-1β、IL-18等炎性因子的产生、释放有明显的促进和调节作用。本研究拟探讨:1.黄芩苷对各组之间蛋白TXNIP/NLRP3表达的调控及相关意义;2.黄芩苷在基因水平上是否对TXNIP/NLRP3两组相关蛋白表达产生影响及其可能的机制。方法:由于肠缺血再灌注损伤主要因缺氧复氧而引起,所以通过以大鼠肠上皮隐窝细胞(IEC-6)建立缺氧复氧模型。通过设立对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+黄芩苷0.5X 10-3mol/L组、缺氧复氧+黄芩苷1.0X 10-3mol/L组、缺氧复氧+黄芩苷5.0×10-3mol/L组。首先以完全培养基将各组备用细胞组正常培养,然后将各组分别给与常规培养或缺氧处理后重新加入新鲜完全培养基和黄芩苷溶液,移入常规培养箱中12小时后。以四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖率;用免疫印迹方法(Western blot)测定TXNIP及NLRP3炎性小体的表达水平;并采用实时荧光定量方法测定TXNIPmRNA和NLRP3mRNA的表达水平。结果:缺氧复氧再灌注12h后,对照组与各干预组相比较。MTT法显示吸光度值对照组(A组):0.513±0.006,缺氧复氧组(B组):0.269±0.004,缺氧复氧+0.5×10-3 mol/L黄芩苷溶液组(C组):0.325±0.005,缺氧复氧+1.0×10-3mol/L黄芩苷溶液组(D组):0.382±0.010,缺氧复氧+5.0×10-3 mol/L黄芩苷溶液组(E组):0.424±0.006,表明黄芩苷可以明显减轻细胞缺氧复氧后的凋亡。TXNIP相对表达量(A 组:0.141±0.011,B 组:0.420±0.009,C 组:0.364±0.010,D 组 0.294±0.008,E 组 0.259±0.007),NLRP3 相对表达量(A 组 0.788±0.018,B 组 0.620±0.023,C组 0.572±0.021,D 组 0.484±0.014,E组 0.378±0.010)各干预组中 TXNIP 蛋白和NLRP3表达水平增加(P<0.05),且随着黄芩苷浓度升高,表达量降低(P<0.05)。TXNIPmRNA 相对表达量(A 组 1±0,B 组 1.449±0..062,C 组 1.460±0.065,D 组1.462±0.082,E 组 1.455±0.056),NLRP3mRNA 相对表达量(A 组 1±0,B 组1.609±0.026,C 组 1.629±0.025,D 组 1.615±0.018,E 组 1.620±0.015),表明黄芩苷对TXNIP蛋白和NLRP3炎性小体蛋白相关基因的表达没有明显的差异(P>0.05)。结论:缺血再灌注损伤时引起肠道上皮细胞凋亡增加,而黄芩苷可以减少因缺氧复氧引起的肠道上皮细胞的凋亡,黄芩苷可能通过基因后调控以影响TXNIP/NLRP3的表达水平以减轻肠上皮细胞在缺氧复氧中的损伤。