鹅正常肝脏与肥肝差异表达蛋白质检测与分析

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鹅肥肝形成过程中,肝脏在形态与组成等方面产生了一系列变化,而这些变化的物质基础是蛋白质。本研究以12只110日龄朗德鹅为实验材料(填肥组和对照组各6只),填肥组采用高能玉米饲料填饲,对照组正常饲喂,填饲18天后,屠宰取肝,采用蛋白质组学方法寻找正常鹅肝脏与填肥鹅肝脏中差异表达蛋白。主要研究结果如下:(1)蛋白检测实验表明银染Schevchenko法的灵敏度在50ng水平上,Blum法的灵敏度在5~50ng之间,GE法的检测灵敏度高于5ng,经典考马斯亮兰染色的检测灵敏度在0.05~0.5μg之间。(2)采用双向凝胶电泳分别分离朗德鹅正常肝脏和填肥肝脏组织蛋白质,GE法银染,凝胶图谱显示朗德鹅肝脏组织蛋白质多集中于pI 4-6和43.0~97.4Kda。(3)PDQuest软件进行图像分析,获得45个差异蛋白质点,对45个差异表达蛋白点进行MALDI-TOF-MS鉴定,使用国际互联网上Matrix Science公司提供的肽质量指纹图谱鉴定程序进行查询,获得11个具有研究意义的蛋白质:谷氨酸转运体,在肥肝中表达量降低,细胞外高水平的谷氨酸会可能影响鹅中枢神经系统;磷酸甘油酸变位酶与磷酸丙糖异构酶,这两种酶在肥肝中表达量降低,从蛋白质水平说明填肥鹅对能量的需求低于正常鹅;谷胱甘肽硫-转移酶,该酶在肥肝中表达量下降,表明填肥鹅肝脏清除亲脂化合物和解毒功能能力降低;鸟氨酸转氨酶,该酶在肥肝中表达量下调,表明血液中氨浓度升高,可能会对填肥鹅脑细胞造成伤害;GTP环化水解酶I,该酶在肥肝中表达量减少,表明填肥鹅血压与血液中胆固醇可能高于正常鹅;硫氧还原蛋白,该蛋白在肥肝中表达下调,表明该阶段填肥鹅肝脏细胞增殖可能降低;丝氨酸羟甲基转移酶,该酶在肥肝中表达量降低,可能导致填肥鹅基因的异甲基化和DNA修复功能异常;核苷二磷酸激酶,该酶在肥肝中表达量下降,表明填肥鹅抑制肿瘤的形成和转移能力下降;载脂蛋白E,该蛋白在肥肝中表达量降低,这可能会导致填肥鹅血浆胆固醇、三酰甘油的运输及代谢出现异常,肝脏脂类代谢异常。
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