单羧酸转运蛋白4在食管鳞癌中的表达及意义

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背景:  在全球范围内,食管癌在常见的癌症中排名第九且癌症死亡率排名第六。在中国大部分患者是食管鳞状细胞癌。常见治疗方式为手术治疗和放化疗。但是这些治疗方式往往未达到患者的预期治疗效果。因此需求一种新的治疗方法,来提高患者的生存率。单羧酸转运蛋白4(Monocarboxylate transporter4,MCT4)的主要作用是将肿瘤细胞能量代谢过程中有氧糖酵解产生的乳酸转运到细胞外。有很多研究证实,MCT4在口腔鳞癌和结直肠癌等多种肿瘤中有着高表达,且下调其MCT4表达可以减弱肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等。这为临床上治疗恶性肿瘤提供了一个新的思路。通过检索MCT4相关文献,发现MCT4在食管鳞癌中的研究较少。本研究将探讨MCT4在食管鳞癌(组织、细胞)中的表达情况;及其组织表达水平与临床病理参数(淋巴转移、临床分期等)之间的关系;并特异性下调食管鳞癌细胞EC109和EC9706中的MCT4,探讨MCT4对其细胞生物学行为的影响。  材料与方法:  1.材料  1.1 选取我院病理科2014年11月1日到2015年11月1日食管鳞癌患者的组织病理标本,另取癌旁组织病理标本。根据纳入标准和排除标准筛选后,共选取到食管鳞癌组织标本60例,癌旁组织19例。  1.2 正常食管上皮细胞Het1-A、食管鳞癌细胞EC109和EC9706均由我院消化研究所捐赠。  2.方法  2.1 应用免疫组化检测MCT4在60例食管鳞癌组织和19例癌旁组织中的表达情况及分析其表达水平和临床病理参数之间的关系。  2.2 应用Western blot检测食管上皮细胞Het1-A、食管鳞癌细胞EC109和EC9706的MCT4蛋白表达情况。  2.3 应用siRNA瞬时转染的方法下调高表达MCT4的食管鳞癌EC109和EC9706,采用Western blot检测各组细胞中MCT4蛋白表达情况。  2.4 采用乳酸测定试剂盒、CCK8试剂盒、划痕和Transwell技术分别检测下调MCT4表达后,各组细胞内外乳酸水平、增殖能力和迁移侵袭能力的变化情况。  2.5 应用SPSS16.0统计软件进行统计分析,MCT4在食管鳞癌组织中的表达情况和其临床病理参数的比较采用卡方分析或Fisher精确检验分析。细胞实验中各组的比较使用单因素方差分析,检验水准都为α=0.05。  结果:  1.免疫组化结果显示:食管鳞癌组织与癌旁组织相比较,MCT4在食管鳞癌组织中有着更高的表达率(p<0.05),并且与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),而与患者的临床分期(P>0.05)和年龄(P>0.05)等因素无关。  2.Western blot检测结果显示:MCT4在食管鳞癌细胞EC109和EC9706中的表达水平高于正常食管上皮细胞Het1-A(p<0.05)。  3.Western blot检测结果显示:通过siRNA瞬时转染以后的食管鳞癌细胞EC109和EC9706中MCT4蛋白表达水平均下降(p<0.05)。  4.下调食管鳞癌细胞EC109和EC9706中的MCT4的表达后,两种细胞内的乳酸含量均升高(p<0.05),且两种细胞外的乳酸含量均降低(p<0.05)。  5.下调食管鳞癌细胞EC109和EC9706中的MCT4的表达后,两种细胞的增殖能力(p<0.05)、迁移能力(p<0.05)和侵袭能力(p<0.05)均下降。  结论:  1.MCT4在食管鳞癌组织中呈高表达,且与病理分化程度有关。  2.MCT4在食管鳞癌细胞EC109和EC9706中呈高表达,下调其表达,可以减弱食管鳞癌细胞的乳酸转运能力、增殖能力、迁移和侵袭能力。
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