CD36基因位于人的染色体7q11.2，大鼠的第4染色体，小鼠第5染色体。人的CD36基因全长32kb，含有15个外显子，其核酸序列可以产生471个氨基酸的跨膜蛋白，其中大部分为细胞外成分。由于糖基化，其分子量由53kDa增加到78-88kDa。CD36在血小板，单核细胞，巨噬细胞，角质细胞，未成熟的树突细胞，红细胞，激活的B细胞，消化道部分上皮细胞，视网膜，味蕾，乳腺细胞，脂肪细胞，骨骼肌和心肌细胞以及微血管的内皮细胞均有表达。CD36可以与多种配体结合，包括Ⅰ类，Ⅳ类和Ⅴ类胶原，磷酸化的丝氨酸及肌苷，氧化的低密度脂蛋白，凋亡细胞，长链脂肪酸，末端富含多聚糖物质，镰状细胞和疟原虫感染的红细胞。CD36与许多正常生理现象和病理过程有关，如血小板黏附，抗原交叉表达，脑型疟疾，狼疮，乳腺癌，脂肪酸代谢，血管发生，炎症，TGF-β的激活，胰岛素抗性，肥厚性心肌病以及动脉硬化等。 由于CD36功能的多样性和复杂性，有关研究结果并不一致。CD36基因敲除小鼠为研究其功能提供了重要工具。 皮肤是机体与环境的天然屏障，具有重要的保护功能。损伤以及疾病造成的大面积皮肤缺失可以导致许多器官的功能紊乱，甚至死亡。近来细胞学和分子生物学的进展，使伤口的愈合过程更加清晰。伤口愈合过程涉及到可溶性介质，血液成分，细胞外基质和实质细胞的一系列变化。依照时间顺序可以将其过程大致分为三个阶段：炎性反应阶段，组织修复阶段和组织塑性阶段。此三个阶段并不是截然分开的，而是相互重叠。 本研究利用CD36基因敲除小鼠研究CD36对皮肤伤口愈合的影响。 虽然CD36的广泛表达，可以与众多配体的相互作用，功能多样，但是野生型和CD36基因敲除小鼠在大体上并无明显差异。正常生理状态下，HE染色显示两者皮肤组织结构无明显差异。野生型和CD36基因敲除小鼠出凝血时间无明显差异。PECAM免疫组化染色显示两者耳部血管分布，皮肤的血管成分等无明显差异。同样胶原染色无明显差异。 在对野生型和CD36基因敲除小鼠的伤口实验中，CD11和CD45免疫荧光 天津医科大学博士论文染色显示CD36基因的缺失不会影响伤口愈合中的炎性反应。体外上皮细胞和纤维母细胞的培养和增殖移动实验，未发现两者的差异。胶原的形成和沉积的时间以及数量无明显不同。但是，野生型和CD36基因敲除小鼠的伤口愈合速度不同，从第2天开始，CD36基因敲除小鼠伤口愈合明显快于野生型小鼠。第2，3，4，5，6天野生型小鼠的伤口面积大于CD36基因敲除小鼠伤口面积。然而，从第7天起，两者伤口面积无明显差异。PECAM免疫组化染色以及BrdU和PECAM免疫荧光双重染色显示显示野生型和cD36基因敲除小鼠的伤口组织，损伤后第2天起开始有内皮细胞生成。野生型小鼠的血管数目在6天达到高峰，为24.4士1.8/视野。而CD36基因敲除小鼠的新生血管则持续增殖，在8天后才开始减少，其峰值为30.6士1.6/视野。而且，从第3天到第13天，两者新生血管数目有明显差异。同样，野生型小鼠伤口组织中的血管密度，在第6天达到高峰，为208.8士n.8/画2。cD36基因敲除小鼠伤口组织中的血管密度则在第8天最高，为328.6土9.8/画“，而且从第3天到第11天，两者血管密度明显差异。野生型和CD36基因敲除小鼠伤口组织中的平均血管大小，均在第15天达到高峰，分别为780.8士9.5/协扩和980.2士8.9/协扩，而且从第3天到第17天，两者血管平均大小有明显差异。野生型和CD36基因敲除小鼠伤口组织中的血管面积占总面积的比率，均在第8天达到高峰，分别为17.0%士1.1%和24.92士1.既。从第3天到第16天，两者血管面积占总面积的比率差异明显。PE以M和Br洲免疫荧光染色显示，野生型和cD36基因敲除小鼠伤口组织中内皮细胞增殖和新生血管存在明显差异。野生型小鼠在第6天达到峰值，为12 .8士1.2/视野。cD36基因敲除小鼠在第8天达到峰值，为20.1士0.9/视野，而且从第3天到第12天，两者有明显差异。TS卜1原位杂交的显影主要集中于角质细胞的基底，在野生型和印36基因敲除小鼠伤口组织中无明显差异，且TSP一lmRNA的表达均在第5天达到高峰，分别为6.2%士0.既和6.器士0.弱。由于飞P--l是CD36的重要配体之一，且具有抑制血管生成的功能，提示CD36可以介导TsP--l的抑制血管生成，造成CD36基因敲除小鼠伤口中的血管生成明显多于野生型小鼠，可以为创伤的修复提 天津医科大学博士论文供更多的生物活性物质，营养成分等，并带走代谢产物，加速伤口愈合过程。 凋亡实验显示在CD36基因敲除小鼠的伤口愈合中，由于巨噬细胞吞噬凋亡细胞的功能受阻，伤口内凋亡细胞的含量明显增多，提示CD36可以介导巨噬细胞吞噬凋亡细胞的作用。