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目的:探讨CD44基因在白血病K562细胞阿霉素耐药中的可能分子机制,阐明二者之间的相关性,探究逆转白血病耐药的靶基因。方法:1.琼脂糖凝胶电泳实验:检测含CD44质粒的大肠杆菌扩增后CD44.质粒的表达情况,检测是否提取成功;2.电转染实验:将提取后的CD44载体质粒转入K562细胞中制备CD44高表达的K562细胞即K562/CD44细胞;3.用倒置荧光显微镜观察法、Western blot实验和实时荧光定量PCR实验分别检测K562细胞和K562/CD44细胞中CD44标记的绿色荧光蛋白、CD44蛋白和CD44的mRNA表达水平;4.实时荧光定量PCR实验:检测K562细胞及K562/CD44细胞中耐药基因P-gp的mRNA表达水平;5.WST-1细胞增殖实验:用1.Omg/L的阿霉素作用于K562细胞和K562/CD44细胞48h后,检测K562和K562/CD44细胞在相同浓度和相同作用时间下的增殖率;6.Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术:用LOmg/L的阿霉素处理24h后,分别检测K562和K562/CD44细胞的细胞凋亡率;7.Western blot实验分别检测K562细胞和K562/CD44细胞中迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9以及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果:1.琼脂糖凝胶电泳实验结果提示:提取的大肠杆菌质粒电泳后呈现出一条清新明亮的条带;2.倒置荧光显微镜观察结果显示:用电转染法将提取后的CD44质粒转入K562细胞制备的K562/CD44细胞中有绿色荧光蛋白高表达;3.实时荧光定量PCR实验结果显示:与K562细胞相比较,K562/CD44细胞中CD44和耐药基因P-gp的mRNA表达水平均显著升高(P<0.01);4.WST-1细胞增殖实验检测结果:用1.0mg/L的阿霉素作用于K562细胞和K562/CD44细胞48h后,与K562细胞相比较,K562/CD44细胞的增值率明显升高(P<0.01)。5.流式细胞术结果显示:与K562细胞相比较,K562/CD44细胞的凋亡率显著降低(P<0.01);6.Western blot实验结果显示:相比于K562细胞,K562/CD44细胞中CD44、MMP-2、MMP-9、Bcl-2/Bax蛋白的表达水平显著上调(P<0.05或P<0.01),而Bax蛋白的表达量显著下调(P<0.01)。结论:1.CD44过表达抵抗ADR对K562细胞增殖的抑制作用;2.CD44过表达可能通过调控耐药基因P-gp、迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9及凋亡蛋白Bcl-2/Bax参与K562细胞的耐药过程。