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本论文分别制备了能够识别黄曲霉毒素B1的多克隆抗体与单克隆抗体,并建立了检测黄曲霉毒素B1的酶联免疫分析法。用AFB1-BSA作为免疫原,免疫新西兰兔,获得抗AFB1多克隆抗体。通过对免疫分析方法工作条件的优化,建立了检测AFB1的间接竞争ELISA方法,最优工作条件为:包被原包被量为0.05μg/孔,抗体稀释倍数1:30000,封闭液为0.5%脱脂乳粉,标准品稀释液为pH 7.4的0.01 M PBS缓冲液。该方法的灵敏度IC5o值为1.21±0.08 ng/mL,检测限IC15值为0.06±0.01 ng/mL。建立了检测AFB1的直接竞争ELISA方法,方法最佳工作条件为:抗体包被量为0.1 μg/孔,酶标抗原稀释倍数为1:200000,封闭液选择0.5%脱脂乳粉,标准品稀释液为pH 7.4的0.01 M PBS缓冲液。该方法的灵敏度 IC50 值为 0.31±0.01 ng/mL,检测限 IC15 值为 0.04 ± 0.01 ng/mL。经间接竞争 ELISA方法和直接竞争ELISA方法测定AFB1多克隆抗体的特异性,该抗体与AFG1的交叉反应率分别为19.56%和18.29%,与黄曲霉毒素其他结构类似物交叉反应率较低。用AFB11-BSA免疫balb/c小鼠,取小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经过细胞筛选及细胞克隆获得了一株能够稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株5A11C10A。将杂交瘤细胞打入小鼠体内诱导产生的腹水纯化后得到抗AFB1单克隆抗体。采用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒进行鉴定,单克隆抗体的重链亚型为IgGi,轻链亚型为Lambda。利用所得到的AFB1单克隆抗体建立了检测AFB1的间接竞争ELSIA方法,最佳工作条件为:包被原包被量为0.05μg/孔,抗体稀释倍数为1:15000,封闭液为0.5%脱脂乳粉,标准品稀释液为pH 7.4的0.01 MPBS缓冲液。该方法的灵敏度IC50值为4.55±0.13 ng/mL,检测限IC15值为0.74±0.15 ng/mL。建立了检测AFB1的直接竞争ELISA方法,方法最优工作条件为:抗体包被量为0.02 μg/孔,酶标抗原稀释倍数为1:100000,封闭液选择0.5%脱脂乳粉,标准品稀释液为pH7.4的0.01 MPBS缓冲液。该方法灵敏度IC50值为1.07士0.01ng/mL,检测限IC15值为0.13±0.01 ng/mL。采用间接竞争ELISA方法和直接竞争ELISA方法测定AFB1单克隆抗体的特异性,与AFG1交叉反应率分别为23.90%和26.10%,与AFM1的交叉反应率分别为26.32%和25.36%,与黄曲霉毒素其他结构类似物的交叉反应率较低。