脓毒症是导致危重病患者死亡的主要原因。微血栓形成倾向及凝血和炎症之间的交叉对话是脓毒症的重要病理生理特征。脓毒症主要的临床表现并不是有入侵的微生物直接引起的，而是全身炎症反应失衡导致的低血压，凝血和多器官功能障碍综合征。众所周知，在脓毒症中全身炎症反应失衡引起凝血系统激活，抗凝机制抑制和纤溶系统激活。凝血的激活和纤维蛋白沉积是宿主阻止微生物入侵的主要防御手段，并引起以后的炎症反应。然而过度的反应会导致凝血本身引起的疾病，微血栓的形成和器官功能衰竭，甚至DIC。　　 急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病理生理过程与脓毒症很相似，都包括宿主失控的防御反应引起炎症、内皮细胞损伤、促凝活性加强、纤溶活性下降和纤维蛋白沉积。放大的促凝活性和纤溶抑制是脓毒症的病理生理特征，与ARDS相似。在ALI时活化的TF/Ⅶa促发了肺的促凝活性，结果凝血酶大量产生、纤维蛋白沉积。肺泡和间质纤维蛋白沉积是ALI早期的标志性病理生理改变。因此在脓毒症及其引起的肺损伤中需要使用抗凝治疗减轻组织缺氧和减少器官损伤和功能障碍。　　 本研究通过动物实验和细胞实验，研究肝素对脓毒症小鼠急性肺损伤和肺血管通透性的影响，探讨肝素对脓毒症急性肺损伤的治疗作用以及作用机制，探讨肝素对脓毒症血管内皮细胞损伤，尤其肺血管内皮细胞通透性的影响及其机制，为肝素用于临床脓毒症患者的救治提供依据。　　 材料与方法:　　 观察肝素对脓毒症小鼠急性肺损伤、肺血管通透性、肺组织SRC及死亡率的影响。观察肝素对脓毒症小鼠血清血管内皮细胞损伤标志物(sTM、sEPCR)、活化蛋白C和肺组织NF-κB、P38MAPK的影响。观察脓毒症小鼠血清对体外培养的人脐静脉内皮细胞通透性以及内皮细胞形态和骨架的影响。　　 一、研究肝素对腹腔注射内毒素(LPS)致脓毒症小鼠炎症反应、肺损伤和生存率的影响，并探讨肝素的作用机制。方法1.将36只C57BL/6J雄性小鼠平均随机分成3组，即对照组(A组)、内毒素组(B组)和内毒素+肝素组(C组)。静脉注射内毒素后3、6、12小时每个时间点每组取4只采血，处死小鼠、取肺组织。肺组织做病理光镜观察。应用ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和肺组织髓过氧化物酶(MPO)浓度。应用RT-PCR的方法测定肺组织TNF-α、IL-1β表达。应用Western-Blot的方法测定肺组织Src家族激酶(SFKs)中SRC和P-SRC含量。2.将12只C57BL/6J雄性小鼠平均随机分成3组，即对照组(A组)、内毒素组(B组)和内毒素+肝素组(C组)。腹腔注射内毒素后3小时每个时间点每组取4只尾静脉注射伊文思蓝，取肺组织测干湿重及伊文思蓝含量。3.将40只C57BL/6J雄性小鼠平均随机分成2组，即内毒素组和内毒素+肝素组。观察小鼠96 h内的一般状态和存活情况。　　 二、观察肝素对脓毒症小鼠内皮细胞损伤标志物(血清sTM、sEPCR)、血清活化蛋白C和肺、肝组织NF-κB、P38MAPK含量的影响。方法1.将36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成3组，即对照组(A组)12只、内毒素组(B组)12只、内毒素+肝素组(C组)12只。腹腔注射内毒素后3、6、12小时每个时间点每组取4只采血，处死小鼠。6小时时间点取肺、肝、肾标本。肺组织、肝脏、肾脏组织做病理光镜观察。应用ELISA法测定血清APC、sEPCR、sTM浓度。应用Western-Blot的方法测定肺、肝组织NF-κB、P38MAPK含量。　　 三、研究脓毒症小鼠血清对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)单层通透性和细胞骨架形态的影响以及肝素对内皮细胞的作用。方法：1.留取血清：将36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成3组，即对照组(A组)12只、内毒素组(B组)12只、内毒素+肝素组(C组)12只。腹腔注射内毒素后6小时采血。2.应用ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、可溶性血栓调节蛋白(sTM)、可溶性内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)浓度。3.HUVECs细胞株传代培养后随机分3组(n=5)，分别加入方法1留取的3组血清培养。用transwell小室法测定单层内皮细胞通透性；用免疫荧光染色法测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)形态。　　 实验结果：　　 一、1.内毒素组和内毒素+肝素组3、6、12h的血浆TNF-α和IL-1β含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。与内毒素组比较，内毒素+肝素组3、6、12h的血清TNF-α和IL-1β含量均有显著降低(P<0.05)。2.C组较B组光镜下肺组织损伤程度减轻。3.内毒素组和内毒素+肝素组3、6、12h的肺组织干湿重比显著低于正常对照组(P<0.05)、伊文思蓝含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。与内毒素组比较，内毒素+肝素组3、6、12h的肺组织干湿重比显著高于内毒素组(P<0.05)、伊文思蓝含量显著低于内毒素组(P<0.05)。4.内毒素组和内毒素+肝素组3、6、12h的肺组织SRC和P-SRC含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。与内毒素组比较，内毒素+肝素组3、6、12h的肺组织P-SRC含量有显著降低(P<0.05)。4.内毒素+肝素组小鼠较内毒素组症状轻，中位生存时间延长，生存率提高(P<0.05)。　　 二、1.内毒素组和内毒素+肝素组3、6、12h的血清sTM、sEPCR含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。与内毒素组比较，内毒素+肝素组3、6、12h的血清sTM、sEPCR含量均有显著降低(P<0.05)。2.内毒素组和内毒素+肝素组3、6、12h的血清活化蛋白C含量显著低于正常对照组(P<0.05)。与内毒素组比较，内毒素+肝素组3、6、12h的血清活化蛋白C含量有显著升高(P<0.05)。3.C组较B组光镜下肺、肝、肾组织损伤程度减轻。4.内毒素组和内毒素+肝素组3h的肝、肺组织NF-κB、P38MAPK含量均显著高于正常对照组(P<0.05)。与内毒素组比较，内毒素+肝素组3h的肝、肺组织NF-κB、P38MAPK含量均有显著降低(P<0.05)。　　 三、1.B组和C组较A组的内皮细胞通透性明显增加，C组较B组的内皮细胞通透性明显下降。2.A组内皮细胞骨架和形态无明显异常，B组血清孵育后，外周致密带边缘变得毛糙不规则，逐渐出现锯齿样断裂，并形成非极性排列的应力纤维。在C组血清孵育后的内皮细胞，F-actin分布较均匀，细胞外周致密带边缘较规整，在细胞周边偶有应力纤维的形成。　　 结论：　　 一、肝素可以减轻脓毒症小鼠的炎症反应和急性肺损伤，减少肺血管通透性，并显著提高生存率，可能与肝素抑制SRC有关。　　 二、肝素降低脓毒症小鼠血清血管内皮细胞损伤标志物(sTM、sEPCR)，增加血清活化蛋白C，降低肺组织NF-κB、P38MAPK含量。　　 三、脓毒症小鼠血清增加体外培养的内皮细胞通透性，引起内皮细胞形态和骨架异常。肝素干预过的脓毒症小鼠血清可降低对内皮细胞的损伤。　　 肝素具有抗凝和抗炎的作用，在脓毒症治疗中具有广阔的应用前景。