【摘 要】
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目的为了寻找胰腺癌基因治疗新方法,利用细胞转染及筛选、RT-PCR和Western Blot检测等方法将人CD1d基因稳定转染胰腺癌PANC-1细胞株,为从分子和细胞水平上研究CD1d介导胰腺癌
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目的为了寻找胰腺癌基因治疗新方法,利用细胞转染及筛选、RT-PCR和Western Blot检测等方法将人CD1d基因稳定转染胰腺癌PANC-1细胞株,为从分子和细胞水平上研究CD1d介导胰腺癌的免疫逃逸与CD1d抑制剂的免疫治疗奠定理论基础。方法利用携带人CD1d基因的慢病毒LP-S0249-LV201(前期实验已构建),进行病毒滴度测定后；通过慢病毒转染预实验确定MOI值,用LP-S0249-LV201慢病毒转染胰腺癌PANC-1细胞株。嘌呤霉素筛选稳定转染细胞株,使用倒置荧光显微镜在不同时间段观察绿色荧光,并用反转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blot方法验证获得的稳定转染细胞株。结果携带CD1d的重组慢病毒颗粒LP-S0249-LV201浓缩后病毒滴度达到4.4×108copies/ml;重组慢病毒LP-S0249-LV201成功转染胰腺癌PANC-1细胞株。并用含浓度为3ug/ml嘌呤霉素的完全培养基筛选稳转株,荧光显微镜下可见均匀的绿色荧光；经RT-PCR和Western Blot检测证实慢病毒LP-S0249-LV201转染至PANC-1细胞株后,转染细胞CD1d在mRNA转录和蛋白质翻译水平较对照组明显升高。结论慢病毒LP-S0249-LV201成功转染PANC-1细胞株,可有效地使CD1d基因在mRNA水平与蛋白水平均表达,说明成功建立了稳定表达CD1d基因的PANC-1细胞系,为进一步研究CD1d基因在胰腺癌免疫基因治疗中的作用奠定基础。
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