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花色苷作为一种植物天然色素,广泛分布于植物的根茎叶等大部分组织中,是一类具有苯并吡喃结构的黄酮类物质,由六种花色素和多种单糖或二糖组成多种结构形式;作为一种功能性保健物质,具有抗氧化、抗癌、清除自由基等多种特殊功能。近些年由于研究工作不断深入,对花色苷资源认识不断加深,大量研究成果不断得到来自医药界、日用化工等领域各界认可;进一步促进了国内外对花色苷开发力度不断加大。尽管如此,但是在花色苷开发过程中受设备,技术水平及原料来源和储备方式不完善以及花色苷自身的不稳定等影响,在对花色苷开发研究中未取得突破性进展。目前国内对蓝莓花色苷开发纯度上尚只能达到25%左右,国外通过多重分离可将纯度提高到36%,因此在分离纯化上尚有较大的提升空间;采用柱色谱技术结合高速逆流色谱及制备液相等技术,对蓝莓花色苷组分进行单体制备,进而为进行结构鉴定和药理研究提供重要基础,将是花色苷研究发展的重要趋势。本研究以市购蓝莓浓缩果汁为原料,在研究蓝莓花色苷稳定性的基础上,通过比较AB-8, D101, LS300, LS300B, LS303, LS306, DM11, HP-20, HP2MGL等九种树脂在蓝莓花色苷最稳定条件下,吸附性能、解吸性能,筛选出最佳树脂并优化分离工艺参数。并通过高速逆流色谱技术对部分蓝莓花色苷单体进行制备分离,为蓝莓花色苷生产工艺研究提供了参考。本研究中的主要成果如下:1.蓝莓花色苷稳定性研究:①考察不同pH条件对蓝莓花色苷稳定性影响,发现蓝莓花色苷在pH1.0-3.0范围内比较稳定,pH3.0时处理中花色苷损伤最少此时蓝莓花色苷最稳定。②4℃,25℃,40℃三种不同温度对蓝莓花色苷稳定性影响比较,发现4℃下花色苷最稳定。③对pH、温度、时间三因素三水平进行L9(33)正交试验,得出花色苷最稳定的条件为pH3.0,温度4℃,时间1.5h,三种因素对蓝莓花色苷影响顺序是温度>pH>时间。④不同离子对蓝莓花色苷稳定性影响:发现氧化剂Fe3+、Cu2+对花色苷稳定性影响较大,还原剂和K+等对蓝莓花色苷稳定性有一定促进作用。2.大孔树脂分离纯化蓝莓花色苷研究:以1.24mg/g花色苷含量市购蓝莓浓缩汁为原料,对AB-8, D101, LS300, LS300B, LS303, LS306, DM11, HP-20, HP2MGL等九种树脂进行静态吸附和静态解吸,通过吸附能力和解吸能力比较最终确定HP2MGL为最适分离蓝莓花色苷树脂,在pH3.0条件下吸附率为82.56%,解吸率为95.79%,解吸效果最好。通过动态吸附解吸试验,表明影响该树脂对蓝莓花色苷分离纯化效果的主要因素主次关系为:上样浓度>洗脱体积>洗脱流速>乙醇浓度>上样流速;采用上样浓度为0.75g/ml,上样流速3.5BV/h,乙醇浓度为50%,洗脱流速为3.0BV/h,洗脱体积为6.0BV,通过一次柱分离可将花色苷纯度提高到28.9±0.3%,相对国内目前纯化状况有了明显提高;该方法快捷、无污染、无毒,对工业生产将具有良好指导意义。3.高速逆流色谱分离蓝莓花色苷:采用甲基叔丁基醚:正丁醇:乙腈:0.2%三氟乙酸水溶液(1.5:4:1:5)为溶剂系统以及转速850 r/min、固定相流速20 mL/min、流动相流速2.0 mL/min、检测器波长280nnm等操作参数,可有效分离纯化分离出来三个峰,此方法安全、快捷,有效。