目的术后切口疼痛常会引起交感神经系统激活,应激反应程度增加,患者循环波动的同时,胃肠功能也会受累,使胃肠的动力状态发生不规则变化,从而引起腹胀、腹泻、恶心、呕吐,甚至引起返流误吸,危及患者生命安全。作为脑肠肽,胃动素从中枢及外周广泛参与了胃肠功能及动力调整与控制。超小剂量纳洛酮可以保持阿片药物镇痛效果,降低胃肠道的不良反应。但不同剂量纳洛酮复合吗啡芬太尼鞘内注射及切口痛对SD大鼠海马、脊髓、胃体、十二指肠、血浆胃动素(motilin,MTL)产生的影响尚不清楚。本研究拟观察急性切口痛、纳洛酮、阿片药物等多模式镇痛对大鼠海马、脊髓、胃体、十二指肠、血浆胃动素及其受体影响,探讨其对胃肠动力调节与控制的中枢机制,为临床术后镇痛、PONV治疗和研发PONV治疗药物提供新的思路。方法(一)年龄6~8周龄,体重180~220 g,清洁级SD品种大鼠(雄性)156只(天津实验动物中心提供)。课题组采用随机数字表法,将156只大鼠分为对照组(C组)和切口痛组(P组),每组78只。P组以七氟醚麻醉SD大鼠,制备切口痛模型,行右侧足底部足跖肌切口,长约1cm,后以青霉素药液擦拭伤口。C组仅给与七氟醚麻醉SD大鼠,以青霉素药液擦拭伤口。各组选取6只大鼠,准备行机械缩足阈值(PWMT)与热缩足反射潜伏期(PWTL)测定。时间选择术前24小时(T0)、术后1小时(T1)、6小时(T2)、24小时(T3)、48小时(T4)、72小时(T5)。在造模术后72小时各个时间点,各组中选取12只大鼠,取胃体及十二指肠、血浆组织,采用ELISA法测定各部位MTL表达情况。将P组大鼠对应时点PWMT、PWTL与胃体、十二指肠、血浆动态MTL变化趋势进行相关比较。(二)清洁级健康雄性SD大鼠,体重在180~220g之间,先行鞘内置管,7日后取置管成功大鼠72只,采用随机数字表法分为6组(n=12):生理盐水组(NS组)、切口疼痛组(P组)、吗啡+芬太尼组(MF组)、吗啡+芬太尼+纳洛酮1组(MFN1组)、吗啡+芬太尼+纳洛酮2组(MFN2)、吗啡+芬太尼+纳洛酮3组(mfn3组)。p组、mf组、mfn1组、mfn2组、mfn3组需行右足跖切口痛模型。之后各组取6只大鼠在鞘内置管前24小时(t0)、切口痛前24小时(t1)、术后1小时(t2)、3小时(t3)、6小时(t4)、24小时(t5)、48小时(t6)、72小时(t7)对机械缩足阈值(pwmt)与热缩足反射潜伏期(pwtl)进行检测。每组取组内剩余的6只大鼠,在术后6小时处死,取海马、胃体、十二指肠组织及血浆,采用elisa法对胃动素浓度进行检测。(三)健康雄性sd大鼠,体重180~220g,取鞘内置管成功大鼠72只,随机分为6组(n=12):生理盐水组(ns组)、吗啡芬太尼组(mf组)、切口痛组(p组)、纳洛酮+切口痛组(np组)、吗啡芬太尼+切口痛组(mfp组)、吗啡芬太尼+纳洛酮+切口痛组(mfnp组)。p组、np组、mfp组、mfnp组行右足跖肌切口。各组取其中6只于鞘内置管前24h(t0)、造模前24h(t1)、术后1h(t2)、3h(t3)、6h(t4)检测机械缩足阈值(pwmt)与热缩足反射潜伏期(pwtl)。各组取剩余6只于术后6h即刻断头处死,取血浆、胃体、十二指肠、脊髓组织,以elisa法检测胃动素浓度。应用westernblot方法检测脊髓胃动素受体表达的情况。应用免疫荧光方法检测脊髓胃动素及其受体表达情况。结果(一)与对照组比较,切口痛组在术后1-48小时对应时点pwmt减低(p<0.05),术前24小时及术后72小时无显著差异(p>0.05);切口痛组72小时各个时间点与组内前一个时间点比较,pwmt在术后1小时减低,在术后24小时增高,术后24-72小时逐步递增(p<0.05);与对照组比较,切口痛组术后1小时到48小时pwtl减低(p<0.05),术前24小时及术后72小时无显著差异(p<0.05);切口痛组术后1小时至术后72小时各个时间点与组内前一个时间点比较,在术后1小时,pwtl减低,术后24小时比术后1小时和术后6小时增高,术后24-72小时逐步递增(p<0.05);与对照组比较,切口痛组胃体mtl水平在术后1小时到术后48小时下降(p<0.05),在术前24小时及术后72小时无显著差异(p>0.05);切口痛组在术后1小时胃体mtl减少,在术后24小时增加,在术后24小时到术后72小时逐步递增(p<0.05);与对照组比较,切口痛组在十二指肠mtl水平于术后1小时到术后48小时减低(p<0.05),术前24小时及术后72小时无显著差异(p>0.05);切口痛组在术后1小时十二指肠mtl减低,在术后24小时增加,在术后24小时到术后72小时逐步增加(p<0.05)。与对照组比较,切口痛组血浆mtl水平术后1小时到术后48小时减少(p<0.05),在术前24小时及术后72小时无显著差异(p>0.05);切口痛组在术后1小时血浆mtl减低,在术后24小时增加,在术后24小时到术后72小时逐步增加(p<0.05)。切口痛组pwmt、pwtl与胃体mtl水平变化趋势呈正相关性(r=0.970、0.931,p<0.01)。切口痛组pwmt、pwtl与十二指肠mtl水平变化趋势呈负相关性(r=-0.9913、-0.9748,p<0.01)。切口痛组pwmt、pwtl与血浆mtl水平呈正相关性(r=0.952、0.879,p<0.05)。(二)mfn3组、p组在t2、t3、t4、t5、t6时间点与ns组相比较,pwmt有显著差异(p<0.05)。于t4时间点,mfn2组与ns组pwmt比较差异有统计学意义(p<0.05)。与ns组比较,p组在t2、t3、t4时点和mfn3组在t2、t3、t4、t5、t6时间点pwtl比较有显著差异(p<0.05)。而与p组相比较,mfn3组t2、t3、t4、t6时间点pwtl比较有显著差异(p<0.05)。在海马、胃体、十二指肠组织及血浆中,p组、mf组、mfn1组、mfn3组胃动素的表达情况与ns组比较显著差异(p<0.05)。海马、胃体、十二指肠组织中,在mfn2组胃动素的表达情况与ns组比较无显著差异(p>0.05)。结论(一)术后急性疼痛参与了大鼠胃体、十二指肠及血浆胃动素表达的调控。导致大鼠胃体、血浆mtl表达下调,而导致大鼠十二指肠mtl表达上调。术后急性疼痛大鼠疼痛行为学表现与胃体、十二指肠、血浆mtl表达存在一定关联,与胃体、血浆mtl表达存在正相关性;与十二指肠mtl表达存在负相关性。(二)1ng/kg纳洛酮鞘内注射抑制了吗啡和芬太尼、切口疼痛对大鼠海马水平MTL表达的调控,使其接近生理水平。(三)脊髓内MTL可通过与该部位受体结合参与胃肠动力调控。阿片类药物、纳洛酮及急性切口痛都分别参与了脊髓MTL及其受体表达的调控,但其影响趋势及程度并不一致。