背景在我国,随着社会生活水平的提高以及生活方式的转变,高血压病的发病率稳步上升,2002年全国居民营养与健康状况调查资料显示,我国成人高血压患病率为18.8%,全国有高血压患者约1.6亿。作为最常见的慢性病,高血压是引起脑卒中、冠心病和肾功能衰竭等疾病的重要基础疾病之一。西药降压虽然具有降压迅速、顺应性良好的优势,但降压药的不良反应较多,很多病人甚至不能忍受而放弃治疗。中医药治疗高血压具有独特的优势,如降压稳定而持久,同时症状改善明显,不良反应较少。陈宝田教授根据祖国医学中“诸风掉眩,皆属于肝”、“无痰不做眩”等相关理论,结合数十年临床经验,创制加味镇眩方,用于高血压病的治疗,效果良好。如能合理开发应用,将有助于弥补西药降压的不足,平稳降压、改善高血压患者临床症状、减少降压药物的不良反应,提高我国近两亿高血压患者的生活质量和健康水平。在高血压的病理生理中,微血管对高血压及其并发症的形成可能具有更重要的作用。微血管密度的减少,不仅导致血液平行通路下降,而且引起外周血管阻力的增高,从而推动动脉血压的持续升高；微血管密度的减少,又能使各个靶器官组织的物质能量代谢水平、储备能力及物质交换能力下降,最终导致靶器官的损害。本研究的主要目的在于：一、探讨加味镇眩方在动物实验研究和临床试验研究中的降压作用,二、探讨加味镇眩方对高血压微血管系统的影响及其他作用机制。第一章加味镇眩方降压作用的实验研究目的加味镇眩方的降压作用。方法将50只SHR大鼠随机分为加味镇眩方高剂量组、加味镇眩方中剂量组、加味镇眩方低剂量组、卡托普利组、对照组,经过12周的干预,分别测定基础血压、心率和2周、4周、6周、8周、10周、12周的血压及心率,以及干预结束后血浆AngⅡ含量。结果血压组间比较显示：各组间血压有统计学差异(F=54.557,P=0.000)；与对照组相比,加味镇眩方低剂量组(P=0.001)、中剂量组(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)及卡托普利组(P=0.000)均能降低SHR血压；与高剂量组相比,加味镇眩方低剂量组血压较高(P=0.029)、卡托普利组降压效果更好(P=0.001)均有统计学差异,中剂量组血压与之相比无统计学差异(P=0.249)不同时间的血压水平有统计学差异(F=209.221,P=0.000)。从各个时间点来看,治疗前五组SHR大鼠血压无统计学差异(F=0.850,P=0.501),治疗后2周(F=59.646,P=0.000)、4周(F=56.970,P=0.000)、6周(F=45.251,P=0.000)、8周(F=45.546,P=0.000)、10周(F=57.358,P=0.000)、12周(F=75.150,P=0.000)血压均有统计学差异。加味镇眩方低剂量组(2周P=0.089、4周P=0.002、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)、中剂量组(2周P=0.001、4周P=0.000、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)、高剂量组(2周P=0.000、4周P=0.000、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)及卡托普利组(2周P=0.000、4周P=0.000、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)在治疗后各个时间点血压均比对照组低.加味镇眩方高剂量组在第12周末取得最好的降压效果,与卡托普利组降压效果相当(P=0.020),与低(P=0.000)、中剂量组(P=0.001)相比有统计学差异,其他各个时间点卡托普利组血压均比加味镇眩方高剂量组低(2周P=0.000、4周P=0.000、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000)。在整个实验中,中药组的血压呈平稳持续下降过程,而卡托普利组血压则较快下降,并保持稳定。时间和分组之间有交互效应(F=25.646,P=0.000)组间比较显示：各组间心率有统计学差异(F=11.594,P=0.000)；与对照组相比,加味镇眩方低剂量组(P=0.004)、中剂量组(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)均能降低SHR心率,卡托普利组对SHR大鼠心率无明显影响(P=0.297)；与高剂量组相比,加味镇眩方低剂量组(P=0.209)、中剂量组(P=0.596)心率无统计学差异。不同时间的心率水平有统计学差异(F=40.907,P=0.000)。从各个时间点来看,治疗前五组SHR大鼠心率无统计学差异(F=0.981,P=0.427)；治疗后2周(F=3.911,P=0.008)、4周(F=7.220,P=0.000)、6周(F=8.949,P=0.000)、8周(F=9.179,P=0.000)、10周(F=12.621,P=0.000)、12周(F=30.622,P=0.000)心率均有统计学差异,与对照组相比,加味镇眩方低剂量组(2周P=0.045、4周P=0.006、6周P=0.005、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)、中剂量组(2周P=0.002、4周P=0.001、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)、高剂量组(2周P=0.002、4周P=0.000、6周P=0.000、8周P=0.000、10周P=0.000、12周P=0.000)在治疗后各个时间点均能减慢SHR大鼠心率；卡托普利组在各个时间点与SHR大鼠组心率均无统计学差异。时间和分组之间存在着交互效应(F=7.449,P=0.000)。组间血浆AngⅡ含量的比较：各组血浆AngⅡ含量有统计学差异(F=7.047,P=0.000),与对照组相比,加味镇眩方低剂量组(P=0.015)、中剂量组(P=0.006)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)均能降低血浆AngⅡ含量；与高剂量相比,加味镇眩方低(P=0.142)、中剂量组(P=0.257)、卡托普利组(P=0.359)在降低血浆AngⅡ方面无统计学差异。结论加味镇眩方可降低SHR大鼠血压,可能与降低SHR大鼠心率及血浆AngⅡ含量有关。第二章加味镇眩方对SHR血管内皮功能的影响目的：通过对自发性高血压大鼠(SHR)内皮依赖的耳廓微血管反应,以及NO的生物合成和生物利用途径的研究,探讨加味镇眩方的降压机制。方法：将50只SHR大鼠随机分为加味镇眩方高剂量组、加味镇眩方中剂量组、加味镇眩方低剂量组、卡托普利组、对照组,12周干预结束,SHR大鼠麻醉后,用激光多普勒系统分别测定耳廓微血管基础血流量以及温热刺激下的耳廓微血管血流量；处死SHR大鼠,分别测定其血浆NO含量、主动脉NOS活性、主动脉cGMP含量。结果：治疗后,各组大鼠耳廓微血管的基础血流灌注量无统计学差异(F=0.633,P=0.641)。将基础血流量作为协变量,采用协方差分析,可以看到,在温热刺激下,各组耳廓微血管血流量有统计学差异(F=55.40,P=0.000)。与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.000)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)及卡托普利组(P=0.000)均能够增加SHR大鼠耳廓微血管血流量,与其他各组相比,加味镇眩方高剂量均能够增加SHR大鼠耳廓微血管血流量(P=0.000),卡托普利与低剂量中药组血流灌注量无统计学差异(P=0.450)。在温热刺激下,各组之间耳廓微血管血流灌注变化率存在差异(χ2=39.692,P=0.000),对照组对温热刺激的变化最不敏感,血流灌注增加最少,其次为卡托普利组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。各组血浆NO(F=3.400,P=0.016)、主动脉NOS活性(F=2.892,P=0.033)及主动脉cGMP含量(F=8.195,P=0.000)有统计学差异。与对照组相比,加味镇眩方低剂量组对SHR大鼠血浆NO(P=0.058)、主动脉NOS活性(P=0.070)无明显影响,加味镇眩方中(P=0.007)、高剂量组(P=0.006)和卡托普利组(P=0.002)均能够明显提高SHR大鼠血浆NO含量,加味镇眩方中(P=0.022)、高剂量组(P=0.009)和卡托普利组(P=0.004)均能够明显提高主动脉NOS活性。与高剂量组相比,加味镇眩方低(P=0.254)、中剂量组(P=0.958)和卡托普利组(P=0.731)血浆NO含量无统计学差异,加味镇眩方低(P=0.393)、中剂量组(P=0.734),卡托普利组(P=0.737)主动脉NOS活性无统计学差异。与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.000)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)和卡托普利组(P=0.009)均能提高SHR大鼠主动脉cGMP含量；与加味镇眩方高剂量组相比,加味镇眩方低(P=0.306)、中剂量组(P=0.905)主动脉cGMP含量无统计学差异,卡托普利组(P=0.035)主动脉cGMP含量较低。结论加味镇眩方可通过影响SHR大鼠NO/NOS/cGMP合成及利用系统,增加SHR大鼠耳廓微血管血流灌注量,改善血管内皮功能。第三章加味镇眩方对SHR大鼠心肌基质金属蛋白酶-2和左室重塑的影响目的：通过观察加味镇眩方对SHR大鼠左室质量及左室质量指数、左心室心肌胶原浓度、心肌MMP-2蛋白表达,探讨其对左室重塑的作用及其可能机制。方法：将50只SHR大鼠随机分为加味镇眩方高剂量组、加味镇眩方中剂量组、加味镇眩方低剂量组、卡托普利组、对照组,12周的干预结束后,动物称重处死后,电子天平称取左心室和室间隔质量为左心室质量,左室质量指数(LVMD=左心室质量(g)／体重(kg)。称取50mg左心室组织测定羟羟脯氨酸含量,其他组织4℃生理盐水洗净吸干,称重,4%多聚甲醛液中固定后石蜡包埋切片后免疫组织化学方法检测心肌MMP-2蛋白。结果：体重：各组间体重存在差异(F=3.548,P=0.013),与卡托普利组相比,加味镇眩方低(P=0.003)、中(P=0.034)、高剂量组(P=0.004)和对照组(P=0.004)体重增加,与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.904)、中剂量组(P=0.401)、对照组(P=1.000)体重无统计学差异。左心室质量：各组间左心室质量存在差异(F=10.868,P=0.000),与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.001)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)左心室质量明显减少。与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.013)左心室质量增加,中剂量组(P=0.237)、卡托普利组(P=0.082)左心室质量无统计学差异。左室质量指数：各组间左室质量指数存在差异(F=9.550,P=0.000)；与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.001)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.001)左心室质量指数明显下降；与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.019)、卡托普利组(P=0.017)左心室质量指数增加,中剂量组(P=0.198)左心室质量指数无统计学差异。各组SHR大鼠心肌MMP-2蛋白表达有统计学差异(F=170.854,P=0.000),与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.037)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)均能够降低心肌MMP-2蛋白表达；与高剂量组相比,低剂量组(P=0.000)、中剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)心肌MMP-2蛋白表达增加。各组大鼠左室心肌胶原浓度有统计学差异(F=25.535,P=0.000),与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.000)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)左室心肌胶原浓度均下降。与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.012)、卡托普利组(P=0.004)胶原浓度增加,中剂量组与之无统计学差异(P=0.285)左室质量与终点血压显著相关(r=0.645,P=0.000),左室质量指数与终点血压显著相关(r=0.580,P=0.000)。结论：加味镇眩方能够降低心肌基质金属蛋白酶-2的表达、降低左室质量、降低左室质量指数及左室心肌胶原浓度。第四章加味镇眩方对SHR大鼠心、脑、肾微血管稀疏的影响目的：通过观察加味镇眩方组对SHR大鼠心、脑、肾微血管密度的影响,探讨其对高血压微血管系统的影响及其可能机制。方法：将50只SHR大鼠随机分为加味镇眩方高剂量组、加味镇眩方中剂量组、加味镇眩方低剂量组、卡托普利组、对照组,12周的干预结束后,动物称重处死后,迅速分离左心室,称取50mg左心室组织测定羟羟脯氨酸含量,其他组织4℃生理盐水洗净吸干,称重,立即投入到4%多聚甲醛液中固定12h。同时分离大脑、肾脏,分别称重后,沿冠状面切开,立即投入到4%多聚甲醛液中固定,石蜡包埋后切片,CD34染色免疫组织化学方法检测大鼠心肌、大脑、肾脏微血管密度。结果：各组心肌微血管密度有统计学差异(F=5.212,P=0.002)。与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.029)、中(P=0.024)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.032)均能够提高SHR大鼠心肌微血管密度。与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.026)、中剂量组(P=0.031)、卡托普利组(P=0.023)SHR大鼠脑组织微血管密度无统计学差异各组SHR大鼠心肌微血管密度有统计学差异(F=22.793,P=0.000)。与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.000)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.007)均能够增加SHR大鼠心肌微血管密度。与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.030)、卡托普利组(P=0.000)SHR大鼠心肌微血管密度降低,中剂量组与之无统计学差异(P=0.080)各组肾小管周围微血管密度有统计学差异(F=26.820,P=0.000)。与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.000)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)均能够增加SHR大鼠肾小管周围微血管密度。与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.003)、卡托普利组(P=0.001)SHR大鼠肾小管周围微血管密度降低,中剂量组肾小管周围微血管密度与之无统计学差异(P=0.093)。各组肾小球微血管密度有统计学差异(F=29.766,P=0.000)。与对照组相比,加味镇眩方低(P=0.000)、中(P=0.000)、高剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.000)均能够提高SHR大鼠肾小球微血管密度。与加味镇眩方高剂量组相比,低剂量组(P=0.000)、卡托普利组(P=0.001)SHR大鼠肾小球微血管密度减少,中剂量组肾小球微血管密度与之无统计学差异(P=0.076)。肾小管周围微血管密度以及肾小球微血管密度与血压的具有相关性,分别为(r=-0.427,P=0.003)和(r=-0.500,P=0.000),心肌(r=-0.172,P=0.247)、大脑(r=-0.255,P=0.084)微血管密度与终点血压无明显相关。结论：加味镇眩方各个剂量组均能改善高血压主要靶器官心、脑、肾脏微血管稀疏的作用,高剂量组在改善脑组织微血管稀疏方面效果最好,中、高剂量组对于心、肾小球及肾小管周围微血管稀疏的效果最好。加味镇眩方对改善微血管稀疏的作用优于西药卡托普利。高血压肾小球及肾小管周围微血管密度与血压具有相关性。第二部分临床部分加味镇眩方治疗原发性高血压的疗效观察目的：通过加味镇眩方对原发性高血压患者血压及中医证侯的疗效观察,探讨其降低血压的临床有效性及安全性。方法：所有病例来源于河南省高血压病医院(河南省中医药研究院附属医院)门诊及高血压病区,性别不限,年龄在18岁-65岁,共90例。试验符合临床试验医学伦理,知情同意后进入临床试验。入组病例须符合高血压低危或中危(1～2级)诊断及中医肝火亢盛证或痰湿壅盛证诊断。90例患者随机分为中药治疗组和卡托普利对照组,中药治疗组45例,卡托普利对照组45例,中药组给予加味镇眩方治疗；对照组以西药卡托普利片(12.5mg,日二次),疗程4周。分别观察治疗前后的血压水平、中医证候积分及安全性指标。两组病例在性别(χ2=3.455,P=0.063)、年龄(t=0.429,P=0.669)、病程(t=—1.157,P=0.251)无统计学差异。两组治疗前收缩压无统计学差异(Z=-0.543,P=0.587)；舒张压无统计学差异(Z=-1.091,P=0.275)；中医证侯积分,无统计学差异(Z=-0.734,P=0.463)。结果：不同时间收缩压有统计学差异(F=369.678,P=0.000),治疗后两组收缩压均下降；两组之间收缩压变化无统计学差异(F=0.132,P=0.719),时间和分组之间无交互效应(F=1.120,P=0.297)。不同时间舒张压有统计学差异(F=50.230,P=0.000),治疗后两组舒张压均下降,两组之间舒张压变化无统计学差异(F=4.010,P=0.053)。时间和分组之间无交互效应(F=0.005,P=0.944)。不同时间中医证侯积分有统计学差异(F=368.841,P=0.000),治疗后两组中医证侯积分均降低,两组之间中医证侯积分变化有统计学差异(F=10.462,P=0.003),治疗组优于对照组。时间和分组之间有交互效应(F=59.588,P=0.000)。两组在降压疗效方面无统计学差异(Z=-0.759,P=-0.448)。两组在改善中医证侯方面有统计学差异(Z=-5.147,P=0.000),治疗组优于对照组。安全性评价：两组患者治疗前后实验室各指标检测均正常,卡托普利组因皮疹剔除1例,因咳嗽脱落6例,加味镇眩方组因无法坚持服药脱落7例。结论：加味镇眩方和卡托普利(25mg/d)均能降低高血压患者的血压,两者在降压方面疗效相当,收缩与舒张压下降均无显著差异。中药与卡托普利均能够改善中医症候体征,中药组疗效显著优于卡托普利组。