解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)BI2是一株高效拮抗菌株,该菌株对二十多种植物病原菌和霉菌等多种丝状真菌具有较强的拮抗作用。本文主要研究了芽胞杆菌BI2的诱变育种和高产抑菌物质的发酵培养基和发酵条件,且对其芽胞增殖的发酵条件和所产抑菌物质的分离纯化进行研究,具体研究内容如下:确定初步筛选方法后,利用ARTP系统采取不同时间处理BI2。处理后从4个处理时间的菌株初筛平板上筛选出621株有明显抑菌圈的菌株,再次筛选后确定16株产抑菌圈较大菌株,经复筛确定5株抑菌率较高的突变株,并经过遗传稳定性实验最终确定一株稳定高产抑菌物质突变株BI2-012,其抑菌率比出发菌株提高22.70%。为了优化突变株高产抑菌物质的培养基和发酵条件,经碳源、氮源单因素实验确定麦芽糖和可溶性淀粉作为碳源、硝酸钠和酵母粉与谷氨酸钠作为氮源。通过考虑交互作用的正交试验最终确定最佳发酵培养基为酵母粉1.5%,谷氨酸钠2%,硝酸钠0.8%,可溶性淀粉0.17%,麦芽糖0.33%,NaCl 0.5%,吐温80 0.06%。通过正交试验确定最佳发酵条件为:装液量60mL/250mL,温度30℃,接种量2%,发酵时间36h,摇床转速200 r/min,pH 7.5。经过优化后菌株抑菌率提高了 11.70%。在芽胞增殖的优化中,突变株培养12h时向培养基中添加0.015%Mn2+,发酵结束后发酵液中芽胞数最多。通过正交试验确定芽胞增殖最佳发酵条件:装液量65 mL/250mL,摇床转速220r/min,接种量4%,发酵24h后温度从30℃调整为37℃。在第48 h时停止发酵,芽胞的数量可达峰值1.20×109 cfu/mL,比优化之前提高了63.50%。将发酵液通过膜分离法、大孔吸附树脂法和离子交换树脂法进行分离,然后利用C18中低压制备色谱做制备,减压浓缩后得到抑菌物质粗提物。通过比较几种色谱柱类型和分离效果确定抑菌物质两种分析方法,一是利用C18色谱柱分析,向流动相水中添加5 m四丁基硫酸氢铵做修饰剂。二是利用HILIC亲水色谱柱分析,用制备型亲水柱可以放大条件做制备。