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背景和目的卵巢癌是女性生殖器官常见的肿瘤之一。因卵巢癌临床早期无症状,鉴别其组织类型及良、恶性相当困难。80%的卵巢癌病人发现时已是中晚期,其5年生存率仅为35%。而在早期发现的病人中,5年生存率超过90%,其中许多病人仅通过外科手术便获得治愈。因此,提高该病的早期诊断率一直是医学界关注的一个热点。目前最普遍使用的卵巢癌生物标记物是肿瘤抗原CA125,尽管80%的晚期卵巢癌病人CA125浓度不正常,但是50%~60%的I期卵巢癌病CA125浓度不增高。CA125作为标记物的阳性预测值不到10%。因此,需要寻找特异性更强和灵敏度更高的肿瘤分子标记物。噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选特异性结合蛋白或多肽的强有力的生物技术,其是将外源蛋白通过与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性。在噬菌体表面表达出各种氨基酸组合的短肽,通过与特定的靶标反应,使展示特定蛋白的噬菌体从表达有各种外源性蛋白的噬菌体肽库中筛选出来,然后进行序列测定,获得相应的结构和功能信息。我们运用噬菌体随机肽库筛选卵巢癌患者的血清,鉴定出卵巢癌表达的肿瘤抗原,期望为卵巢癌的诊断和预后提供新的标记物。方法1.分别用正常血清和卵巢癌血清包被微孔板,运用减性筛选的方法,先将噬菌体与正常血清预吸附,然后未结合的噬菌体再与卵巢癌血清进行吸附,得到与卵巢癌患者血清结合的噬菌体后扩增,重复筛选三次,获得差异性明显的噬菌体。2.挑取单个噬菌斑,通过ELISA方法检测与卵巢癌血清的结合力,选择稳定和差异明显的噬菌体扩大血清样本含量再进行鉴定,最终得到特异性较高的单个噬菌体。3.提取单个噬菌体通过引物-96Ⅲ测序,并根据短肽插入位点和氨基酸遗传密码表得到插入短肽序列。4.按照短肽序列合成多肽,进行抑制实验,鉴定其特异性。结果1.经过三轮筛选后,挑取单个噬菌体经反复鉴定后得到7个特异性较好的噬菌体;2.经测序该7个噬菌体所携带序列均相同;3.该短肽序列ELISA鉴定CA125阳性卵巢癌血清及CA125阴性卵巢癌结果无显著差异;4.该短肽序列ELISA分别鉴定卵巢癌血清,乳腺癌血清,宫颈癌血清结果显示该短肽序列与卵巢癌血清有特异性结合;5.经抑制实验进一步验证了该短肽序列与卵巢癌血清有特异性结合。结论本实验通过噬菌体展示库筛选出能与卵巢癌相关抗原特异性结合的短肽,为卵巢癌早期诊断、联合检测提供候选标记物,并有可能为卵巢癌的靶向治疗打下基础。