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目的： 正常人的胆汁是无菌的。胆道感染是外科最常见的感染性疾病之一，包括胆管炎和胆囊炎。胆汁细菌学检查对于胆囊炎和胆道内细菌感染的诊断具有重要意义。由于胆道感染的细菌主要是需氧菌，本研究对厦门某三甲医院胆道感染患者的分离菌中需氧菌构成情况以及主要需氧菌的药敏情况进行分析，以期为临床治疗胆道感染提供可靠的依据，为临床医生合理使用抗菌药物提供理论支撑。 方法： 对2012年12月～2014年10月于厦门某三甲医院临床诊断胆囊或胆管炎症的住院患者，收集胆汁标本进行需氧菌培养。 （1）对需氧菌进行分离培养，对其鉴定和药敏检测采用法国生物梅里埃公司的VITEK2COMPACT全自动微生物分析系统。 （3）采用WHONET5.6软件对胆汁分离菌的构成情况和药敏分析，剔除重复菌株。 （4）分别利用纸片法及三维试验验证胆汁分离菌的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC酶表型。 （5）设计引物，PCR扩增AmpC及ESBLs基因，经纯化后委托上海立菲生物科技有限公司测序。 （6）测序结果提交美国国立研究院行序列同源性分析，鉴定所检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs及AmpC基因型及其亚型。 结果： 对送检胆汁标本共653例进行需氧菌培养（肝胆外科送检的例数最多），其中394例阳性，阳性率为60.3％。394例培养阳性患者中，284例伴有结石（占72.1%）。 绝大多数分离菌为G-细菌（占67.5%），其中主要由大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等引起，占G-细菌的66.0%。其他常见的G-细菌包括阴沟肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、嗜水气单胞菌等。G+细菌相关的胆道感染，主要由粪肠球菌和屎肠球菌引起，占G+细菌的60.4%。分离菌包括两种或两种以上的患者为63例。 大肠埃希菌对喹诺酮类抗生素耐药，对左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为44.1%和46.2%。对于大肠埃希菌，其它耐药率超过40%的药物有氨苄西林、头孢呋辛、哌拉西林、头孢曲松和氨苄西林/舒巴坦，而敏感率在80%以上的抗生素有替加环素、阿米卡星、头孢替坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶和头孢吡肟，未检出美洛培南、亚胺培南和厄他培南耐药菌株。对于肺炎克雷伯菌，左氧氟沙星和环丙沙星的敏感性分别为80%和76.5%。3、4代头孢菌素对肺炎克雷伯菌的体外活性较好，头孢曲松、头孢他啶和头孢吡肟的耐药率分别为35.3%、27.3%和11.4%。胆汁分离的非发酵菌占较少部分，其中，铜绿假单胞菌对常见抗生素普遍敏感，但鲍曼不动杆菌对抗生素的耐药现象明显。粪肠球菌是胆汁分离细菌中最常见的革兰阳性细菌。粪肠球菌对奎奴普丁/达福普丁全部耐药，而屎肠球菌对奎奴普丁/达福普丁全部敏感。粪肠球菌和屎肠球菌对四环素的耐药率为>40%。对粪肠球菌和屎肠球菌体外活性较好的药物有替加环素、万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁，未检出万古霉素耐药的粪肠球菌和屎肠球菌。高水平氨基糖苷类耐药菌株的检出率均为24%。 189株临床分离大肠埃希菌和70株肺炎克雷伯菌中，经头孢西丁纸片琼脂扩散试验筛选，对头孢西丁不敏感的大肠埃希菌有42株，阳性率为22.2%（42株/189株）；对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌有12株，阳性率为17.1%（12株/70株）。根据CLSI推荐ESBLs确证试验结果的判断标准[51]，在189株临床分离大肠埃希菌中，ESBLs确证试验阳性菌株共有71株，阳性率为37.6%（71株/189株）；肺炎克雷伯菌中，ESBLs确证试验阳性菌株共有22株，阳性率为31.42%（22株/70株）。189株临床分离大肠埃希菌和70株肺炎克雷伯菌中，头孢西丁三维试验阳性的大肠埃希菌有38株，阳性率为20.1%（38株/189株）；肺炎克雷伯菌有7株，阳性率为10.0%（7株/70株）。在189株临床分离大肠埃希菌中，多重PCR扩增AmpC酶基因，扩增阳性菌株有38株，阳性率为20.1%（38株/189株），主要以耐药基因CMY-2为主；在70株临床分离肺炎克雷伯菌中，扩增阳性菌株有6株，阳性率为8.6%（6株/70株），主要以耐药基因DHA-1为主。DNA测序后，经BLAST对比发现：71株ESBLs PCR阳性的大肠埃希菌中，TEM基因型有10株、SHV基因型有13株、CTX-M基因型有48株；22株ESBLs PCR阳性的肺炎克雷伯菌中，TEM基因型有5株、SHV基因型有11株、CTX-M基因型有6株。 结论： （1）本地区胆道感染分离菌主要以G-细菌为主，主要来源于肠道细菌。 （2）本实验分离的需氧菌最常见的为大肠埃希菌、粪肠球菌；胆道感染的细菌学特征为临床医生经验性治疗提供实验依据。 （3）选临床抗菌药物时针对革兰阴性菌可首选含β-内酰胺酶抑制剂的复合制剂如哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶或第四代头孢菌素。 （4）ESBLs仍是临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢菌素类抗菌药物产生耐药的主要机制，但AmpC酶在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌呈现逐渐增加的趋势。 （5）肠道分离大肠埃希菌AmpC酶以CMY-2基因型流行为主，产ESBLs的菌株以CTX-M型为主,其次是SHV型和TEM型；肺炎克雷伯菌中AmpC酶以DHA-1基因型流行为主，产ESBLs的菌株以SHV型为主，其次是TEM型和CTX-M型。