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目的:采用病证结合的方法,以冠心病痰证为研究对象,采集冠心病痰证黄腻苔、白腻苔患者及健康人舌苔及大便样本,运用冠心病痰证量表、舌诊仪客观化测量,研究冠心病痰证腻苔特异的微生物标志物及其与痰证证候的相关性。方法:1.腻苔微生物高通量测序:采用16S rDNA高通量测序技术,对冠心病痰证腻苔（黄腻苔、白腻苔）患者舌苔及其肠道微生物进行分析,并设立健康人作为对照组,研究冠心病痰证患者以及痰证黄腻苔与白腻苔之间的差异菌种属。2.冠心病痰证量表宏观测量:在入院后第1,4,7天,采用量表调查的方法,对冠心病痰证患者进行量表测量,评价其变化情况。3.典型腻苔客观化测量:采用舌诊仪采集冠心病痰证患者的舌象信息,包括舌质及舌苔颜色、舌苔面积、齿痕、瘀斑、裂纹及点刺。结果:1.一般情况:本研究共纳入合格研究对象41例,包括冠心病痰证白腻苔24例,黄腻苔17例,健康人对照组21例。痰浊证组中,男性27例,占65.8%,女性14例,占34.2%,平均年龄67.5（41-78）岁,病程36（1-620）个月,合并高血压30人,占73.2%,合并糖尿病5人,占12.2%,高脂血症9人,占22.0%。2.微生物高通量测序:（1）测序质量①舌苔样本质量评价:PE Reads（77292±6270）,Raw Tags（68165±7893）,Clean Tags（62086±8710）,AvgLen（bp）（422±2）,GC（%）（52.08±0.64）,Q20（%）（95.86±0.48）,Q30（%）（92.2±0.8）,提示舌苔样本质量合格,可以进行下游分析。②大便样本质量评价:PE Reads（80284±5665）,Raw Tags（73765±5349）,Clean Tags（68206±5276）,AvgLen（bp）（419±3）,GC（%）（51.52±1.22）,Q20（%）（96.28±1.02）,Q30（%）（92.89±1.68）,提示样本质量合格,可以进行下游分析。（2）OTU及物种分析①舌苔微生物OTU数量及物种分布:舌苔样本微生物OTU数为184±24个,总体分布在10± 1个门,16±2个纲,25±3个目,44±5个科,86±10个属。②舌苔优势微生物物种:病例组优势菌群:A.门水平为拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）;B.纲水平主要为拟杆菌纲（Bacteroidia）、Bacilli、Gammaproteobacteria、Negativicutes、梭菌纲（Clostridia）;C.目水平主要为 Bacteroidales、Lactobacillales、Selenomonadales、Betaproteobacteriales、Clostridiales;D.科水平主要为普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、链球菌科（Streptococcaceae）、韦荣菌科（Veillonellaceae）、奈瑟菌科（Neisseriaceae）、疣微菌科（Ruminococcaceae）;E.属水平主要为链球菌属（Streptococcus）、奈瑟菌属（Neisseria）、韦荣菌属（Veillonella）、普雷沃氏菌属7（Prevotella7）、罗斯菌属（Rothia）。健康人对照组优势菌群:A.门水平为拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）;B.纲水平主要为 Bacteroidia、Bacilli、Gammaproteobacteria、Negativicutes、梭菌纲（Clostridia）;C.目水平主要为 Bacteroidales、Lactobacillales、Selenomonadales、Betaproteobacteriales、Fusobacteriales;D.科水平主要为普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、链球菌科（Streptococcaceae）、韦荣菌科（Veillonellaceae）、奈瑟菌科（Neisseriaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）;E.属水平主要为链球菌属（Streptococcus）、奈瑟菌属（Neisseria）、韦荣菌属（Veillonella）、普雷沃氏菌属7（Prevotella7）、梭杆菌属（Fusobacterium）。③肠道微生物OTU数量及物种分布:大便样本微生物总体的OTU数为156±37条,总体分布在9± 1个门、15±2个纲、23±5个目、41±9个科,91 ± 17个属。④肠道微生物优势物种:病例组优势菌群:A.门水平主要为拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）;B.纲水平主要为拟杆菌纲（Bacteroidia）、梭菌纲（Clostridia）、Negativicutes、Gammaproteobacteria、Fusobacteriia;C.目水平主要为拟杆菌目（Bacteroidales）、梭菌目（Clostridiales）、Selenomonadales、Enterobacteriales、Betaproteobacteriales;D.科水平主要为拟杆菌科（Bacteroidaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）、Ruminococcaceae、韦荣菌科（Veillonellaceae）、纤毛菌科（Leptotrichiaceae）;E.属水平主要为纤毛菌属（Leptotrichia）、粪杆菌属（Faecalibacterium）、普雷沃氏菌属 9（Prevotella9）、链球菌属（Streptococcus）。健康人对照组优势菌群:A.门水平主要为拟杆菌门（Bacteroidetes）、厚壁菌门（Firmicutes）、变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）;B.纲水平主要为拟杆菌纲（Bacteroidia）、梭菌纲（Clostridia）、Negativicutes、梭杆菌纲（Fusobacteriia）、放线菌纲（Actinobacteria）;C.目水平主要为拟杆菌目（Bacteroidales）、梭菌目（Clostridiales）、Selenomonadales、Pasteurellales、Betaproteobacteriales;D.科水平主要为拟杆菌科（Bacteroidaceae）、毛螺菌科（Lachnospiraceae）、纤毛菌科（Leptotrichiaceae）、韦荣菌科（Veillonellaceae）、疣微菌科（Ruminococcaceae）;E.属水平主要为纤毛菌属（Leptotrichia）、粪杆菌属（Faecalibacterium）、奈瑟菌属（Neisseria）、韦荣菌属（Veillonella）、拟杆菌属（Bacteroides）。（3）Alpha多样性比较①舌苔微生物多样性病例组的 Ace（203±28）、Chao（197±29）、Shannon（0.10±0.05）、Simpson（3.01 ±024）指数以及覆盖度（99.95± 0.01）。健康人对照组的 Ace（181 ±41）、Chao（177±43）、Shannon（0.13±0.07）、Simpson（2.81±0.44）指数以及覆盖度（99.96± 0.01）。病例组舌苔微生物Alpha多样性与健康人对照组比较,其Ace（p=0.10）、Chao（p=0.16）、Simpson（p=0.09）指数均升高,差异无统计学意义,Shannon指数降低（p=0.02）,差异有统计学意义。②肠道微生物多样性病例组的 Ace（203±28）、Chao（197±29）、Shannon（0.10±0.05）、Simpson（3.01 ±0.24）指数以及覆盖度（99.95± 0.01）。健康人对照组的 Ace（181 ±41）、Chao（177±43）、Shannon（0.13±0.07）、Simpson（2.81±0.44）指数以及覆盖度（99.96±0.01）。病例组肠道微生物Alpha多样性与健康人对照组比较,其Ace（p=0.0007）、Chao（p=0.0013）、Simpson（p=0.009）指数均升高,Shannon 指数降低（p=0.03）,差异有统计学意义。（4）Beta多样性①舌苔微生物病例组与健康人对照组之间舌苔微生物Beta多样性差异为12.5%（p=0.001）;白腻苔组与黄腻苔组之间舌苔微生物Beta多样性差异为4.6%（p=0.432）。②肠道微生物病例组与健康人对照组之间肠道微生物Beta多样性为38.9%（p=0.001）;白腻苔组与黄腻苔组之间肠道微生物Beta多样性为9.2%（p=0.210）。病例组与健康人对照组在舌苔和肠道微生物Beta多样性方面比较均有差异,白腻苔组与黄腻苔组在舌苔和肠道微生物Beta多样性方面比较也均有差异,且肠道微生物Beta多样性高于舌苔微生物。（5）物种丰度差异分析①舌苔微生物物种丰度差异分析:病例组与对照组相比,病例组在拟普雷沃氏菌属（Alloprevotella）（P-adj<0.0001）、弯曲杆菌属（Campylobacter）（P-adj=0.014）以及毛绒厌氧杆菌属（Lachnoanaerobaculum）菌属（P-adj=0.035）丰度下降,且差异显著。②肠道微生物物种丰度差异比较病例组与对照组相比,微生物丰度差异较多,在属水平,在链球菌属（Streptococcus）（P-adj=0.025）、奈瑟菌属（Neisseria）（P-adj=0.029）、韦荣菌属（Veillonella）（P-adj=0.020）、普雷沃氏菌属 7（Prevotella7）（P-adj=0.050）、放线菌属（Actinomyces）（P-adj=0.045）、颗粒链菌属（Granulicatella）（P-adj=0.004）、普雷沃氏菌属（Prevotella）（P-adj=0.040）、Solobacterium（P-adj=0.023）、Lachnoanaerobaculum（P-adj=0.046）、Oribacterium（P-adj=0.047）、消化链球菌属（Peptostreptococcus）（P-adj=0.025）、弯曲杆菌属（Campylobacter）（P-adj=0.023）、Catonella（P-adj=0.009）、Bergeyella（P-adj=0.023）、Mogibacterium（P-adj=0.032）方面丰度较高,在拟杆菌属（Bacteroides）（P-adj=0.027）、Bilophila（P-adj=0.026）、Blautia（P-adj=0.023）、罗斯氏菌属（Roseburia）（P-adj=0.013）、毛螺菌属（Lachnospira）（P-adj=0.045）方面丰度较低。（6）功能预测①舌苔微生物KEGG功能分析:病例组与健康人对照组在KEGG方面功能分析比较有差异,具体为:A.classl水平,病例组在遗传信息处理（Genetic Information Processing）（P-adj=0.018）方面功能表达较低,在代谢（Metabolism）（P-adj=0.031）方面表达较强,且差异显著。B.class2水平,病例组在氨基酸代谢（Amino acid metabolism）（P-adj=0.005）等方面较高,在翻译（Translation）（P-adj=0.019）,核酸代谢（Nucleotide metabolism）（P-adj=0.034）,萜类化合物和聚酮化合物的代谢（Metabolism of terpenoids and polyketides）（P-adj<0.0001）,复制与修复（Replication and repair）（P-adj=0.025）,折叠、分选与降解（Folding,sorting and degradation）（P-adj=0.011）,细菌感染（Infectious diseases:Viral）（P-adj=0.003）,细胞生长与死亡（Cell growth and death）（P-adj=0.004）方面表达较低,且差异显著。②舌苔微生物COG分析:病例组与健康人对照组在COG方面功能分析比较有差异,具体为A.classl水平,病例组代谢（Metabolism）（P-adj=0.002）方面表达较高,差异有显著意义。B.class2水平,病例组在氨基酸转运与代谢（Amino acid transport and metabolism）（P-adj=0.037）方面表达较高,在转录后修饰、蛋白质周转以及伴侣（Posttranslational modification,protein turnover,chaperones）（P-adj=0.033）,复制、重组与修复（Replication,recombination and repair）（P-adj=0.022）,细胞壁/膜/包膜生物合成（Cell wall/membrane/envelope biogenesis）（P-adj=0.023）方面表达较低,且差异有统计学意义。③大便微生物KEGG分析病例组与对照组相比:A.classl水平,病例组在遗传信息处理（Genetic Information Processing）（P-adj=0.001）、人类疾病（Human Diseases）（P-adj<0.0001）方面表达较高,在有机系统（Organismal Systems）（P-adj=0.003）、细胞过程（Cellular Processes）（P-adj<0.0001）及代谢（Metabolism）（P-adj=0.001）方面表达较低。B.class2水平,病例组在翻译（Translation）（P-adj=0.031）、核苷酸代谢（Nucleotide metabolism）（P-adj=0.016）、膜运输（Membrane transport）（P-adj=0.043）、折叠,分类和降解（Folding,sorting and degradation）（P-adj=0.047）、神经退行性疾病（Neurodegenerative diseases）（P-adj=0.010）、其他氨基酸的代谢（Metabolism of other amino acids）（P-adj=0.001）、转录（Transcription）（P-adj=0.007）、内分泌和代谢疾病（Endocrine and metabolic diseases）（P-adj=0.001）、寄生虫病（Infectious diseases:Parasitic）（P-adj=0.005）方面表达较高,在免疫系统（Immune system）（P-adj=0.009）、环境适应（Environmental adaptation）（P-adj=0.001）、其他次级代谢产物的生物合成（Biosynthesis of other secondary metabolites）（P-adj<0.0001）、细胞运动（Cell motility）（P-adj<0.0001）方面表达较低。④大便微生物COG分析病例组与对照组相比,A.classl水平,病例组在细胞过程和信号（Cellular processes and signaling）（P-adj<0.0001）方面表达较高,差异有显著意义。B.class2水平,病例组在翻译,核糖体结构和生物发生（Translation,ribosomal structure and biogenesis）（P-adj=0.005）、翻译后修饰,蛋白质周转,伴侣蛋白（Posttranslational modification,protein turnover,chaperones）（P-adj=0.004）、核苷酸转运和代谢（N ucleotide transport and metabolism）（P-adj=0.008）、脂质运输和新陈代谢（Lipid transport and metabolism）（P-adj=0.006）、次生代谢产物的生物合成,转运和分解代谢（Secondary metabolites biosynthesis,transport and catabolism）（P-adj=0.034）、RNA 加工和修饰（RNA processing and modification）（P-adj=0.002）、染色质结构和动力学（Chromatin structure and dynamics）（P-adj=0.006）以及细胞外结构（Extracellular structures）（P-adj=0.016）方面表达较高,在细胞运动（Cell motility）（P-adj=0.030）、防御机制（Defense mechanisms）（P-adj=0.003）、碳水化合物的运输和新陈代谢（Carbohydrate transport and metabolism）（P-adj=0.008）、信号转导机制（Signal transduction mechanisms）（P-adj=0.001）、转录（Transcription）（P-adj=0.008）方面表达较低,且差异有统计学意义。3.冠心病痰证量表宏观测量结果:（1）临床症状冠心病痰证患者的主要症状为胸闷、苔腻、脉滑、形体肥胖、疲乏、苔黄腻、苔白腻、口唇青紫、失眠、口干。寒化证与热化证组比较:其中胸闷、胸痛、苔腻、脉滑、形体肥胖是共有症状,热化苔黄腻组临床表现:苔黄、口干、口苦、舌质红是热化;寒化白腻苔组:疲乏、失眠、痰多、痞满是寒化证临床表现。（2）痰证量表测量得分冠心病痰证患者在胸闷、苔腻、脉滑三个条目的得分较高,在其他条目的得分较低。具体为:胸闷（2.01±0.5）、胸痛（0.54±0.74）、痰多（0.62±0.83）、身重（0.63±0.82）、痞满（0.48±0.74）、形体肥胖（0.9±0.88）、头重（0.44±0.77）、头晕（0.42±0.67）、舌质淡（0.67±0.95）、苔腻（1.89±0.49）、脉滑（1.47±0.77）、脉濡（0.07±0.26）、脉弦（0.74±0.95）、总分（10.89±2.94）。量表三次重复测量之间两两比较,结果提示冠心病痰证患者在胸闷（p<0.0001）、胸痛（p<0.0001）、痰多（p=0.026）、痞满（p<0.0001）、头晕（p<0.0001）、脉滑（p<0.0001）以及总分（p<0.0001）七项方面有差异,且差异有统计学意义。4.典型腻苔客观化测量:（1）冠心病痰证白腻苔组:舌象测量:①舌质R值（158±25）、舌质G值（116±19）、舌质B值（112±21）;②舌苔R值（180±26）、舌苔G值（145±19）、舌苔B值（140±25）;③舌苔面积比（0.38±0.22）;④齿痕:齿痕数量1（0-4）,齿痕面积0.57（0-8.06）;⑤裂纹:裂纹数量1.5（0-8）,最大裂纹长度 0.17（0-0.94）。（2）冠心病痰证黄腻苔组:舌象测量:①舌质R值（159±17）、舌质G值（108±]3）、舌质B值（99±16）;②舌苔R值（188±13）、舌苔G值（141±11）、舌苔B值（126± 13）;③舌苔面积比（0.28±0.15）;④裂纹:裂纹数量2（0-7）,最大裂纹长度0.17（0-0.92）。（3）健康对照组:舌象测量:①舌质R值（147±17）、舌质G值（119±16）、舌质B值（123±15）;②舌苔R 值（169±17）、舌苔 G 值（153±14）、舌苔 B 值（158±16）;③舌苔面积比（0.75±0.21）。病例组黄腻苔组与白腻苔组相比,提示黄腻苔组舌质B值（P<0.0001）、舌苔B值（P<0.0001）较低。病例组白腻苔组与对照组相比,提示冠心病痰证白腻苔组舌苔B值较低,最大齿痕面积较大,裂纹数较多,最大裂纹长度较长,点刺数较少。病例组黄腻苔组与对照组相比,提示冠心病痰证黄腻苔组在舌质B值较低,舌苔R值较高,舌苔B值、G值较低,裂纹数较多,最大裂纹长度较长,点刺数较少,最大点刺长度较短,最大点刺面积较小。结论:1.冠心病痰证舌苔微生物、肠道微生物在物种多样性、物种丰度方面与健康人对照组存在差异。2.舌苔物种差异分析和功能差异分析揭示:Streptococcus、Neisseria、Veillonella、Prevotella7、Actinomyces可能是冠心病痰证潜在的生物标志物。3.痰证量表宏观测量揭示:胸闷、苔腻、脉滑权重较高。4.舌象客观化测量提示:病例组舌质B值、舌苔B值、舌苔G值降低,为冠心病痰证诊断提供参考。