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目的本研究应用免疫组织化学染色方法,观察对照组肠壁、先天性巨结肠症(Hirschsprung’s disease,HD)患者有神经节细胞段和无神经节细胞段肠壁神经组织中钙视网膜蛋白(Calretinin,CR)的表达结果,并同时对比观察神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)、S-100蛋白(S-100 protein,S-100)、组织蛋白酶D(cathpsin D,CAD)的三种肠道神经标志物在对照组及巨结肠肠壁表达情况,目的在于了解HD的病理生理改变以及寻找诊断先天性巨结肠的简便有效的方法。方法1、收集苏州大学附属儿童医院小儿外科2005—2008年手术切除HD标本54例,包括HD扩张段与痉挛段。以15例年龄与之相符的无HD患儿的手术切除结肠标本作为对照组。2、分别对HD痉挛段、扩张段、对照组肠壁组织切片进行CR、NSE、S-100、CAD的免疫组织化学染色和HE染色,计算机成像系统照相存盘,用图像分析软件(Image-Pro-Plus)分别判定各指标在HD扩张段与痉挛段神经丛中阳性染色面积百分比。所得数据用SPSS12.0统计软件包进行处理分析。结果1、无论是HE或免疫组化染色HD的扩张段神经节细胞皆存在,肌层神经纤维有不同程度的排列改变,神经节细胞大小不等;痉挛段均未见神经节细胞。2、在正常结肠及HD扩张段肠壁免疫组化染色可见钙视网膜蛋白在肌间及黏膜下神经丛中对神经节细胞呈强阳性表达,神经纤维也呈阳性反应;而HD痉挛段肠壁的免疫组化染色则可见钙视网膜蛋白在肌间神经丛及黏膜下神经丛大多表达阴性(90.7%),仅少量呈弱阳性表达(9.3%)。NSE在正常肠壁及HD扩张段肠壁肌间、粘膜下神经丛中神经节细胞及神经纤维中均有表达;在HD痉挛段肠壁可见NSE阳性表达的神经纤维;S-100不表达于神经节细胞,组织蛋白酶D表达于神经节细胞。3、定量分析:CR、NSE、S-100、CAD分别在HD痉挛段之间神经丛中阳性染色面积百分率与其在HD扩张段神经丛中阳性染色面积百分率存在差异,有显著统计学意义(P＜0.01)。结论1、钙视网膜蛋白免疫组化染色可很好的显示正常结肠及HD扩张段肠壁的神经节细胞及神经纤维,而在HD痉挛段该指标免疫组化染色结果呈阴性或弱阳性表达。可作为诊断HD很好的神经标志物。2、钙视网膜蛋白在HD的痉挛段肠管内的肌间神经丛及黏膜下神经丛大多表达阴性,仅少量呈弱阳性。对小块组织或直肠黏膜活检诊断HD有帮助,可作为诊断HD的一种敏感有效的方法。3、钙视网膜蛋白在HD痉挛段肠壁表达缺失或减少,可能参与HD的发病机制。