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黑色索瘤是由黑索细胞异常增生引发的常见平复肿瘤,恶性程度极高,占皮肤肿瘤患者死亡的极大部分。我国黑色索瘤发病率呈逐年上升趋势。目前,黑色素瘤的临床治疗主要通过手术、药物治疗、化疗和放疗等方法其对患者毒性大,副作用强,治疗预后不理想,五年生存率不足5%。其中,侵袭转移是其导致黑色索瘤患者复发、死亡的主要原因。因此,寻找具有抑制制黑色素瘤侵袭转移活性的天然植物化学活性成分,已成为国内外肿瘤预防和治疗的研究热点。大量研究表明,植物中广泛存在的一类多酚类物质—黄酮类化合物(flavonoids)具有良好的抗肿瘤作用,抑制肿瘤细胞增殖、新血管形成和侵袭转移等是其抗肿瘤的主要作用方式。本次研究以甘草中提取的一种二氧黄酮单体化合物甘草素(liquiritigenin)为研究对象,国内外研究表明,甘草素具有解痉、抗炎、抗菌、抗溃疡等多种药理作用。本实验室前期研究结果显示,甘草素能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞以及人宫颈癌Hela细胞的增殖,并能通过PI3K/Akt信号通路抑制人肺癌A549细胞的体外迁移能力。但是,甘草素能否有效抑制肿瘤细胞在体内的侵袭和转移及其相关分子机制,尚未见相关报道。因此,本课题拟采川鼠黑色素瘤B16F10细胞体内肺转移模型,应用HE染色、酶联免疫吸附剂测定、蛋白质免疫印迹等相关实验技术,研究甘草素是否抑制黑色素瘤细胞体内侵袭转移能力及其与PI3K/Akt/NF-κB信号通路的关系,为甘草素抑制黑色素瘤细胞体内侵袭转移作用及其相关分子机制提供科学依据。第一部分甘草素对C57BL/6小鼠黑色素瘤侵袭转移的抑制作用目的：探讨甘草素对C57BL/6小鼠黑色索瘤侵袭转移的抑制作用。方法：用B16F10细胞对48只C57BL/6小鼠尾静脉接种形成肺转移模型,随机分为模型对照组、甘草素低(7.5mg/k)、中(15mg/kg)、高剂量组(30mg/kg),另取12只正常C57BL/6小鼠作为空白对照组,共五组。不同剂量甘草素悬浮液灌胃处理动物,3周后处死小鼠,剥离肺组织,称肺重,计算肺指数、比较各组肺转移灶数量、测量转移灶大小、计算小鼠肺转移抑制率,HE染色法观察各组小鼠肺组织的病理变化情况。结果：(1)小鼠肺重结果显示,与空白对照组相比,模型对照组小鼠肺重明显升高(p<0.01)。与模型对照组相比,甘草素处理组小鼠肺重明显降低(p<0.05),随着甘草素剂量的增加,呈剂量效应关系。(2)各组小鼠肺指数结果发现,与空白对照组相比,模型对照组小鼠肺指数明显升高(p<0.01)。各甘草素处理组小鼠肺指数较模型对照组有所降低(p<0.05),随着甘草素浓度的升高,呈剂量效应关系。(3)与模型对照组相比,各甘草素处理组小鼠肺转移灶数量减少(p<0.05),肺转移抑制率升高(p<0.05),随甘草素剂量的升高,呈剂量反应关系。(4)HE染色结果显示,空白对照组小鼠肺组织结构完整,模型对照组小鼠肺组织结构破坏严重,黑色素瘤灶较大,与模型对照组相比,随着甘草素剂量的增加,各组甘草素处理小鼠肺组织结构趋于完整,黑色素瘤灶逐渐减小。结论：甘草素抑制黑色素瘤在C57BL/6小鼠体内的侵袭转移。第二部分甘草素抑制黑色素瘤侵袭转移相关分子机制的研究目的：探讨甘草素抑制黑色素瘤侵袭转移的相关分子机制方法：通过酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的蛋白水平；采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肺组织细胞内MMP-2/9、PI3K的蛋白表达水平；检测蛋白激酶B (Akt)及其磷酸化蛋白表达水平；检测胞浆和胞核内NF-kB蛋白表达水平并计算其比值。结果：与模型对照组相比,随着甘草素剂量的升高(7.5-30mg/kg)的升高：(1)血清中MMP-2/9的蛋白分泌水平均受到抑制,结果均呈剂量效应关系。(2)肺组织细胞中MMP2/9的蛋白表达均下降；PI3K(p85)蛋自表达水平受到抑制；磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达下降,非磷酸化Akt蛋白表达水平无明显变化；胞核内NF-κB (p65)蛋白表达下降,胞核NF-κB (p65):胞浆NF-κB (p65)比值降低(p<0.05)；上述结果均呈现剂量效应关系。结论：甘草素能抑制黑色素瘤在C57BL/6小鼠体内的侵袭转移,其机制可能是甘草素通过阻碍PI3K/Akt/NF-KB通路,降低肿瘤中MMP2/9的蛋白表达水平