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目的：收集2002．1．1～2004．12．30济南地区耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌21株，其中12株来自山东大学齐鲁医院，2株来自山东省省立医院，7株来自济南军区总医院。选取对碳青霉烯类抗生素仍维持耐药的菌株5株进行本项研究。5株细菌均来自住院患者的痰标本，其中4株来自山东大学齐鲁医院（编号为11、12、66及67），1株来自济南军区总医院（编号为40）。选取1株对12种受试抗生素均敏感的鲍曼不动杆菌做为对照（编号为S），该对照株分离于2004年，来自山东大学齐鲁医院住院患者的痰标本。研究该5株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌是否产碳青霉烯酶、所产碳青霉烯酶的分子结构类型以及它们的外膜蛋白图谱，探讨济南地区鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的机制。 方法：提取5株对碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌染色体DNA，使用碳青霉烯酶基因特异性引物blaOXA-23（FR 5’-GATGTGTCATAGTATTCGTCG-3’，RV5’-TCACAACAACTAAAAGCACTG-3’）、blaOXA-24（FR 5’-TTCCCCTAACATGAATTTGT-3’，RV 5’-GTACTAATCAAAGTTGTGAA-3’）、blaIMP（FR 5’-CTACCGCAGCAGAGTCTTTAC-3’，RV 5’-AACCAGTTTTGCCTTACCAT-3’）及blaVIM（FR 5’-TCCGACAGTCAGCGAAAT -3’，RV 5’-GCACAACCACCATAGAGCA-3’）进行聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）。使用blaOXA-23引物时，PCR条件包括94°C×5分钟1个循环，94°C×1分钟、52°C×1分钟、72°C×2分钟30个循环，最后72°C×7分钟延伸；使用blaOXA-24引物时，PCR条件包括94°C×4分钟1个循环，94°C×1分钟、48°C×1分钟、72°C×2分钟30个循环，最后72°C×10分钟延伸；使用blaIMP及blaVIM引物时，PCR条件包括94°C×5分钟1个循环，94°C×30秒钟、56°C×30秒钟、72°C×45秒钟30个循环，最后72°C×7分钟延伸。PCR产物与PMD18-T载体连接，转入DH5α后进行测序。细菌过夜培养液离心后