论文部分内容阅读
目的:收集2002.1.1~2004.12.30济南地区耐碳青霉烯类抗生素的鲍曼不动杆菌21株,其中12株来自山东大学齐鲁医院,2株来自山东省省立医院,7株来自济南军区总医院。选取对碳青霉烯类抗生素仍维持耐药的菌株5株进行本项研究。5株细菌均来自住院患者的痰标本,其中4株来自山东大学齐鲁医院(编号为11、12、66及67),1株来自济南军区总医院(编号为40)。选取1株对12种受试抗生素均敏感的鲍曼不动杆菌做为对照(编号为S),该对照株分离于2004年,来自山东大学齐鲁医院住院患者的痰标本。研究该5株耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌是否产碳青霉烯酶、所产碳青霉烯酶的分子结构类型以及它们的外膜蛋白图谱,探讨济南地区鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素的机制。 方法:提取5株对碳青霉烯类抗生素耐药的鲍曼不动杆菌染色体DNA,使用碳青霉烯酶基因特异性引物blaOXA-23(FR 5’-GATGTGTCATAGTATTCGTCG-3’,RV5’-TCACAACAACTAAAAGCACTG-3’)、blaOXA-24(FR 5’-TTCCCCTAACATGAATTTGT-3’,RV 5’-GTACTAATCAAAGTTGTGAA-3’)、blaIMP(FR 5’-CTACCGCAGCAGAGTCTTTAC-3’,RV 5’-AACCAGTTTTGCCTTACCAT-3’)及blaVIM(FR 5’-TCCGACAGTCAGCGAAAT -3’,RV 5’-GCACAACCACCATAGAGCA-3’)进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)。使用blaOXA-23引物时,PCR条件包括94°C×5分钟1个循环,94°C×1分钟、52°C×1分钟、72°C×2分钟30个循环,最后72°C×7分钟延伸;使用blaOXA-24引物时,PCR条件包括94°C×4分钟1个循环,94°C×1分钟、48°C×1分钟、72°C×2分钟30个循环,最后72°C×10分钟延伸;使用blaIMP及blaVIM引物时,PCR条件包括94°C×5分钟1个循环,94°C×30秒钟、56°C×30秒钟、72°C×45秒钟30个循环,最后72°C×7分钟延伸。PCR产物与PMD18-T载体连接,转入DH5α后进行测序。细菌过夜培养液离心后