艾滋病在全球的持续流行使得发展安全有效的疫苗是控制艾滋病的蔓延的关键，虽然健康教育和艾滋病热线咨询对艾滋病的传播有一定的作用。很明显，健康教育和艾滋病热线咨询不足以遏止艾滋病的播散。尽管还不知道哪一种免疫机制对抗艾滋病毒感染，研究者仍致力于寻找新的抗原呈递系统和评价新的佐剂。病毒样颗粒疫苗是第二代基因工程疫苗，是我们发展针对HIV-1中国株的一条重要的路径。本文报告，在分子流行病学调查的基础上，利用分子生物学技术从HIV-1阳性者未经培养的外周血中克隆HIV-1中国株的结构基因全长的gag和gp120基因，在此基础上利用Bac-to-Bac系统构建病毒样颗粒候选疫苗。 1．中国株HIV-1结构基因gag和gp120基因的克隆和序列分析 为了克隆HIV-1结构基因gag和gp120基因，我们选择了两例来自于广东和一例来自于广西的HIV-1阳性血样，这三例根据HIV-1外膜基因（C2-V3）的测序判定为E亚型并具有代表性；选择了一例来自于河南的HIV-1阳性血样，根据HIV-1外膜基因（C2-V3）的测序判定为B亚型并具有代表性。通过套式PCR得到全长的gag和gp120基因片段，并分别插入到plin8Pr55和pFastBac1载体中。我们首次克隆到全长的中国株A亚型gag基因。序列分析和系统树分析表明：来自于广东和广西的样品的gp120基因归于E亚型而而来自于广东的一个样品的gag基因归于为A亚型；河南样品的gag基因归于B亚型。中国株E亚型gp120基因内的遗传距离为2.56～5.87％，与16株国际标准株比较，遗传距离为3.60～27.98％，最接近于同为E亚型的泰国株，而远离于同为E亚型的非洲株；中国株A亚型gag基因与15株国际标准株比较，遗传距离为10.29～18.48％；中国株B亚型gag基因与15株国际标准株比较，遗传距离为5.72～20.17％。中国株E亚型的系统树分析表明：在1996年时，E亚型进入中国的时间不长。所有的克隆到的gag和gp120基因都具有完整的阅读框架和一些特别的功能性结构域。这些结构基因的遗传特征表明它们适合用来构建病毒样颗粒疫苗载体和E亚型的亚单位疫苗表达载体。 2．构建中国代表株的病毒样颗粒疫苗 通过在上述的A、B亚型gag基因的p7和p6之间缺失54bp或45bp的非必需区并引入多克隆位点构建A、B亚型的VLP载休。扩增B、C和E的V₃区，再将所得的片段插入到相应的VLP载体。然后从相应的VLP载体上切下，插入到pFastBac1载体的polyhedron启动子的下游，重组的pFastBac1质粒转化DH10Bac发生同源重组，经蓝白斑挑选发生同源重组的阳性克隆。用制备的高分子量的大质粒转染昆虫细胞，我们得到了分别带有gag、gagVLP、gagV₃和gp120基因的重组的昆虫杆壮病毒，包括A、B亚型gag的重组昆虫杆壮病毒、A、B亚型缺失的VLP载体昆虫杆壮病毒、2A／E、2B／E、2A／B、2B/B、1A／C和1B／C（*/*斜线前为载体的亚型，斜线后为插入的V3的gagV₃亚型）重组昆虫杆壮病毒和三个E亚型gp120重组昆虫杆壮病毒。WB显示带有gag、gagVLP、gagV₃和gp120基因的重组昆虫杆壮病毒表达相应的gag和gp120，并分泌到上清中。超薄电镜显示用gag、gagVLP和gagV₃的重组昆虫杆壮病毒感染昆虫细胞可形成相应的病毒样颗粒。这些颗粒为空心的大约100nm颗粒样物定位在胞内，明显不同于昆虫杆状病毒本身形成的颗粒。 克隆和表达不同亚型的gag和gp120基因可用于发展针对中国HIV-1流行的多价疫苗。gagV3的表达并形成颗粒样物表明A、B亚型gagVLP载体的构建是成功的，还可用于插入其它的T、B细胞抗原决定簇以扩大免疫的范围。