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随着紧凑型玉米品种的种植和推广、氮肥施用量的增加和种植密度的提高,近年来玉米纹枯病在山东省呈逐年加重的趋势。国内关于纹枯病的研究多集中在水稻和小麦,而对玉米纹枯病的研究相对滞后。本研究对山东省玉米纹枯菌融合群类型、菌丝生长速率、致病性以及遗传多样性进行系统研究,并对山东省玉米生产品种和部分自交系进行抗性鉴定,筛选抗纹枯病的优良玉米材料,为玉米抗病育种和玉米纹枯病的综合防治提供依据。
1.从山东省14个县市采集玉米纹枯病标本,分离得到103个丝核菌菌株。Hoechst33258细胞核染色和融合群测定结果表明,这些菌株分别属于多核丝核菌的AG-1-IA、AG-1-IB、AG-1-IC、AG-3、AG-4-HG-I、AG-5、WAG-Z融合群,双核丝核菌的AG-Ba融合群,以及种类尚未确定的单核丝核菌JN-001。其中AG-1-IA类型菌株占总数的59.22%,为优势融合群。
2.采用病原菌侵染的高粱粒作为接种物,对三个玉米品种(川单14、川单13、成单12)进行苗期接种测定病原菌的致病性。利用DPS系统对测定结果进行UPGMA聚类分析,结果发现不同菌株间致病力存在显著差异,根据平均病情指数将菌株分为致病力强、中、弱三类。平均病情指数在58.89~73.33的为强致病力的菌株,占菌株总数的12.62%;平均病情指数在17.78~54.44的为中等致病力的菌株,占菌株总数的79.61%;平均病情指数在5.56~12.22的为弱致病力的菌株,占菌株总数的7.77%。对各个融合群的致病力进行统计发现,以AG-4-HG-I融合群的致病力最强,AG-1-IC次之,单核丝核菌JN-001致病力最弱,其中优势融合群AG-1-IA菌株致病力分化明显。
3.对玉米纹枯菌的生长速率进行测定,结果表明,不同菌株间生长速率差异较大,生长速率在0.84~2.41mm/h之间,12h后进入快速生长时期。对菌株生长速率和致病力相关性分析发现,二者相关系数为0.5677,存在中等强度的正相关性,符合回归方程X2=-7.0642+26.4067X1(X1=生长速率,X2=病情指数)。
4.利用ISSR标记技术对山东省103个玉米纹枯菌的遗传多样性进行分析。从16个常规引物中筛选出3个重复性好、特异性高的引物。ISSR-PCR结果表明103个测试菌株共产生45个分子标记,其中91.1%的片段具有多态性。各地理群的平均多态位点百分率为51.78%,Neis基因多样性指数(h)平均为0.1754,Shannon信息指数(I)平均为0.2647,显示出地理群间具有较高的遗传多样性。利用NTSYSpc2.10e进行UPGMA聚类分析可将103个菌株分成6个遗传类群,研究发现ISSR遗传群组划分与菌株的地理来源和菌株所属融合群类型存在一定的相关性。
5.通过两年对山东省72份玉米生产品种和30份自交系材料在田间进行纹枯病抗性鉴定,采用被病原菌侵染的高粱粒作为接种物,在玉米拔节中后期接种,按照国家玉米区域试验抗性鉴定标准进行病害分级评定和抗性评价。在102份材料中没有发现免疫品种,抗性级别为高抗、抗、中抗、感、高感的比例分别为1.96%、20.59%、24.51%、33.33%、19.61%,生产品种登海3号和聊玉22号对纹枯病表现高抗。