论文部分内容阅读
未成熟树突状细胞（immature dendritic cells，iDC）在机体外周与中枢免疫耐受维持中发挥重要作用，其以多种机制参与自身免疫耐受的形成。因此，iDC疫苗成为近年来研究抑制器官移植排斥反应和自身免疫疾病治疗领域的热点。iDC疫苗作为免疫治疗的一项重要手段已显示出巨大的临床应用价值，然而iDC疫苗在临床应用过程中仍存在许多问题，如针对不同的抗原iDC的负载方法，疫苗的使用剂量、接种途径及免疫频率，疫苗效果评价等。磁共振成像(magneticresonance imaging，MRI)是一种基于原子物理、对身体无毒无害、分辨率高、可安全进行活体检查的成像方法，可以用来追踪经MRI对比剂标记过的细胞在体内的去向，从而一定程度解决某些问题。将体外培养的iDC经MRI对比剂SPIO标记之后回输入体内，利用MRI对体内的移植细胞进行追踪，可以为将iDC应用于动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)治疗的方法的可行性提供依据。本文主要研究了MRI对比剂超顺磁性氧化铁（superparamagnetic iron oxide，SPIO）体外对iDC的标记效率以及其对iDC活性、抗原吞噬能力的影响，为以MRI追踪iDC疫苗在体内迁移情况的方法的可行性做好理论基础。我们的实验内容包括:密度梯度离心法分离结合巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)，联合阿司匹林诱导培养兔外周血来源的iDC;流式细胞仪检测细胞表面特异性抗原表达情况、光镜下检测细胞形态;普鲁士蓝染色、原子吸收光谱检测SPIO标记后iDC单细胞内铁含量;体外MRI检测不同SPIO标记浓度及不同标记细胞数量对磁共振信号改变程度的影响; Cell Counting kit-8(CCK-8)测定不同浓度SPIO标记对iDC活力的影响;利用荧光染色及转染，激光共聚焦显微镜检测SPIO标记后iDC内溶酶体及自噬体的变化情况;激光共聚焦检测SPIO标记对iDC吞噬动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)抗原氧化性低密度脂蛋白(oxidizedlow-density lipoprotein，ox-LDL)的影响;初步探讨SPIO影响iDC抗原吞噬功能的机理。我们的实验结果显示SPIO的标记浓度在0-200μg Fe/ml范围内时，细胞吞铁量会随SPIO标记浓度的上升而上升，并随之会在MRI中引起更高强度的信号改变。但是细胞的活力却会随着SPIO标记浓度的上升而下降，同时在细胞内产生自噬体。更重要的是，iDC在被SPIO标记之后抗原吞噬能力会显著降低。我们初步探讨了SPIO影响iDC抗原吞噬功能的机理可能是SPIO被iDC吞噬后占据了细胞内的溶酶体空间，阻碍了抗原的降解途径，从而导致了细胞抗原吞噬的减少。