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动脉粥样硬化Atherosclerosis, AS)是危害人类健康的最常见的心血管疾病。进来研究发现在AS斑块处,具有鞘磷脂(SM)的累积,临床流行病研究显示血浆SM升高是AS的独立危险因子。在SM生物合成过程中,鞘磷脂合酶(SMS)是SM合成关键酶之一。载脂蛋白A-I (ApoA-I)是一种载脂蛋白,可和胆固醇、甘油三酯及磷脂结合形成HDL(高密度脂蛋白),在HDL形成过程中可将外周组织的胆固醇转运进入肝脏,即胆固醇的逆向转运过程(RCT),这样则可减少AS的发生率,因此高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)可作为预测AS发生的检测指标,由此看来HDL-C在血液中的含量和AS的发生呈负相关。在HDL形成过程中,ApoA-I可和膜蛋白ABCA1发生相互作用,同时作为胆固醇流出的接受体,形成新生HDL；因此血液中的Apo A-I含量也是和AS的发生呈负相关。本研究目的是探讨SM、胆固醇及Apo A-工之间是否存在关联本文首先构建可调控的Tet-off-SMS调控系统,利用不同剂量的DOX(强力霉素)调节SMS的表达,研究发现Tet-off-SMS系统中SMS-FLAG的表达及酶活均可受DOX调控,且呈剂量依赖效应,差异显著P<0.05,而Apo A-I的分泌在本实验剂量依赖范围内没剂量依赖效应；但和对照细胞Huh7-tTA相比,高表达SMS的肝细胞Huh7 Apo A-I的分泌显著下调,Huh7细胞细胞内Apo A-I的含量显著上调P<0.05,而mRNA水平检测Apo A-Ⅰ的表达,未见显著性差异P>0.05。105化合物抑制SMS酶活所得实验结果除mRNA水平检测未见变化外,SMS低活性促进Apo A-I的分泌,胞内Apo A-I含量显著下调P<0.05。同时本研究还研究了细胞胆固醇和SM含量的变化,在SMS高表达的Huh7细胞胞内胆固醇和SM的含量都增加,低活性SMS的Huh7细胞胞内胆固醇和SM含量都降低,且P都<0.05。为了研究出现出现这种实验结果的可能机制,本文检测了和胆固醇流出相关的膜蛋白ABCA1、ABCG1和SR-BI的mRNA和蛋白水平,结果显示和对照(Huh7-tTA)相比SMS高表达使得ABCA1、ABCG1和SR-BI在mRNA水平和蛋白水平的表达都上调P<0.05,HMG-CoA还原酶的mRNA表达下调P<0.05；而SMS低活性的Huh7(105处理)细胞和野生型细胞(Huh7)相比ABCA1、ABCGl和SR-BI在mRNA水平和蛋白水平的表达都下调P<0.05, HMG-CoA还原酶mRNA表达上调P<0.05。本研究结果显示：1.调节SMS的活性可控制Huh7细胞胞内SM,从而影响细胞胆固醇含量和Apo A-I及胆固醇的分泌。2.细胞内SM和胆固醇浓度之间存在正相关,存在一种锚定现象。3.创新设计105化合物是一个有潜力的SMS活性抑制剂。