【摘 要】
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目的 用全骨髓法和密度梯度离心两种方法对兔骨髓间质干细胞（MSCs）进行体外分离、培养及扩增,对比在培养基中只加入TGF-β1一种诱导物质情况下,两种方法得到的MSCs的成软骨
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目的 用全骨髓法和密度梯度离心两种方法对兔骨髓间质干细胞（MSCs）进行体外分离、培养及扩增,对比在培养基中只加入TGF-β1一种诱导物质情况下,两种方法得到的MSCs的成软骨能力及差别,旨在前人研究的基础上,建立一个更简易、实用的体外诱导培养体系,为软骨缺损修复提供更多的实验依据。 实验方法 用3%戊巴比妥钠1mg/kg耳缘静脉麻醉,无菌条件下用骨穿针从两侧股骨大转子处穿入股骨髓腔内,骨穿针接10ml注射器（内含3000U/ml的肝素0.4ml）,每侧各抽取骨髓3～4ml,混合后等分为两份,一份（A组全骨髓法）中直接加入DMEM-LG培养液,用全骨髓法培养细胞,另一份（B组密度梯度离心法）加入装有Percoll分离液的无菌离心管中,1000r/min离心10min,吸取液面交界处云雾状单核细胞层细胞,制成单细胞悬液,两组的第3代细胞均用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导BMSCs向软骨方向分化。倒置显微镜观察BMSCs的生长情况,用免疫组织化学、原位杂交方法检测TGF-β1诱导的细胞Ⅱ型胶原表达情况。 实验结果 1.相差显微镜观察: 1.1 全骨髓培养组 24h后→部分细胞贴附在瓶壁上,可见一些单核、长梭或多角型细胞
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