背景3-溴丙酮酸（3-bromopyruvate,3-BP）是一种强烷化剂,其通过抑制糖酵解相关激酶己糖激酶2（HK2）来抑制肿瘤细胞ATP产生,从而抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞凋亡的发生。近年来有关3-溴丙酮酸的研究已经取得了很大程度的进步,为临床抗肿瘤的研究提供了新的方向。内质网是细胞内重要的细胞器,是细胞内储存Ca²⁺的主要场所,内质网功能的损伤会引发内质网应激（ER stress）的产生。ER stress在细胞面对外在或内在刺激时发生,对机体起到一定的保护性作用,这些作用可以为机体提供受损修复的机会,内质网应激可以促进细胞凋亡,同时也可以通过影响信号通路促进细胞存活。但是3-溴丙酮酸所诱导的结直肠癌细胞死亡是否有内质网应激的发生,目前还不是很清楚。目的明确3-溴丙酮酸对结直肠癌细胞凋亡的影响,探讨3-溴丙酮酸诱导结直肠癌细胞凋亡中内质网应激所起的作用及机制,联合内质网应激抑制剂为临床治疗结直肠癌提供新的联合用药的策略。方法1.免疫组化检测结直肠癌组织与癌旁组织中HK2表达水平。2.CCK8法检测不同浓度3-BP对结直肠癌细胞RKO、HCT116存活率的影响,筛选出最适宜的药物浓度。3.Western blotting检测不同浓度3-BP对结直肠癌细胞RKO、HCT116凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3表达水平的影响,流式细胞术检测不同浓度3-BP对结直肠癌细胞凋亡的影响。4.Western blotting检测不同浓度3-BP对内质网应激相关蛋白BIP、eIf-2α、p-eIf-2α、ATF4表达水平的影响。5.检测不同浓度3-BP在不同时间点对Ca²⁺浓度的影响。6.CCK8存活率检测3-BP联合内质网应激抑制剂对结直肠癌细胞RKO、HCT116存活率的影响。7.Western blotting检测3-BP联合内质网应激抑制剂对凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3表达水平的影响,流式细胞术检测3-BP联合内质网应激对细胞凋亡的影响。结果1.免疫组化结果显示,与癌旁组织相比结直肠癌组织中HK2表达水平明显升高。2.CCK8结果显示,不同浓度3-BP对结直肠癌细胞RKO、HCT116存活率有明显的抑制作用。随着药物浓度的升高,对细胞活性的抑制效果显著,差异具有统计学意义。（P<0.05）3.Western blotting结果显示,不同浓度3-BP影响凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3表达,随着药物浓度的增加,凋亡率显著升高。流式细胞数检测结果与前者相应。差异具有统计学意义（P<0.05）。4.Western blotting结果显示,不同浓度3-溴丙酮酸对内质网应激相关蛋白BIP、eIf-2α、p-eIf-2α、ATF4的表达均明显增强,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.Ca²⁺浓度检测结果显示,3-BP对Ca²⁺浓度具有明显的时间以及浓度依赖性。6.CCK8结果显示,3-BP联合内质网应激抑制剂对结直肠癌细胞RKO、HCT116存活率有明显的抑制作用,差异具有统计学意义。（P<0.05）7.Western blotting结果显示,3-BP联合内质网应激抑制剂影响凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3表达,联合用药组凋亡显著升高。流式细胞数检测结果与前者相应。差异具有统计学意义（P<0.05）。结论3-BP可显著抑制结直肠癌细胞存活,诱导凋亡的发生,同时通过影响钙离子浓度诱导内质网应激的发生;抑制内质网应激可以增加3-BP诱导的细胞毒性。